Бесплатный вектор на транспортную тему
Человечество постоянно изобретает новые способы передвижения, а также делает старые способы более совершенными, быстрыми и удобными. Мы не представляем себе жизнь без транспорта, а ведь когда-то люди путешествовали месяцами из одной страны в другую. Сегодня мы собрали бесплатные векторные исходники посвященные этому чуду человеческой мысли — транспорту.
Transportation icons set
Transportation Icon Set
Transportation Vector Icons
Transport Pictograms Sets Vectors
Transportation icons vector free
City transports Free Vector
Travel transport Collection
Summer holiday flat icons
Vector set transport for free design. Cer, truck, airplane, bike
Transport Icons Set
Transport icon set
Heavy Construction Yellow Vehicle Pack
Transport Flat Icon Set
Vehicles Icon Set
White Industrial Vehicles
Transportation Color Icons
Cartoon collection of transport icons
Food Truck Vectors
Transport icons
Transportation icons 2 Free vector
Автор подборки — Дежурка
Смотрите также:
- Векторный клипарт на тему фото- и видеокамер
- Векторный клипарт на SEO-тематику
- Бесплатные постеры и фоны для дизайна нa тему вечеринок
Бесплатные водяной пистолет вектор ai
Бесплатные водяной пистолет вектор aiключевые слова
- мультфильм
- детство
- дети
- дизайн
- Борьба
- весело
- забавный
- игра
- пистолет
- значок
- иллюстрация
- изолированные
- Дети
- объект
- пластик
- играть в
- насос
- набор
- выстрелил
- спрей
- брызги
- летом
- символ
- игрушка
- воды
- водяной пистолет
- оружие
- смачивать
- ai
- Бесплатные
- водяной
- вектор
DMCA Contact Us
бесплатная загрузка ( ai, 689.68KB )Связанная векторная графика
- Водяные пузыри eps ai
- Бесплатные водяные пузыри eps ai
- Psd водяные пузыри psd
- Люблю пистолет вектор eps
- Секс-пистолеты eps svg
- Корпоративная бесплатная визитка psd
- Записать текстовый стиль бесплатно PSD psd
- Силуэты пистолетов eps ai
- Приклад ручного пистолета ai
- Красочные водяные кляксы векторов ai
- Люблю пистолет eps
- Револьвер Пистолет eps
- Вектор водяного насоса eps ai
- Бесплатная творческая визитка psd
- Бесплатный вектор Versace svg eps
- Бесплатная корпоративная визитка psd
- Силуэты пистолетов ai
- пистолет в руке вектор eps
- Пистолет Глок векторов ai svg
- Реалистичный пистолет ai
- Бесплатные цветочные векторы svg ai
- Водяной цветок со льдом векторные иллюстрации ai
- Бесплатный макет бумажного пакета psd eps ai svg
- Перекрещенные векторы пистолета eps
- Кубики льда в стиле текста бесплатно PSD psd
- Бесплатный макет iPhone X psd
- Бесплатные водяной пистолет плоский вектор eps svg
- Пистолет Векторный пакет
- Бесплатные векторные веревки eps
- Серьезный человек с пистолетом бесплатно eps
- Бесплатные элегантные стили для фотошопа psd
- Шаблон Мокапа Столовой Палатки Бесплатно PSD psd
- Бесплатный макет коробки CIPUK psd
- НАБОР СВОБОДНОГО ПИСТОЛЕТА. Eps eps
- Бесплатные шаблоны бизнес-инфографики eps psd ai
- пистолеты векторные изображения eps
- Бесплатные декоративные украшения svg eps dwg
- Бесплатные векторные цветок 2 eps
- Мокап упаковки бесплатных планшетов psd
- Бесплатные причудливые линии вектор ai
- Водяной пистолет векторные иконки ai svg
- Мальчик держит водяной пистолет svg ai
- Мокап кофейного мешка бесплатно PSD psd
- Бесплатные Векторный набор пистолетов ai
- Бесплатные макеты футболок psd
- пистолет векторная графика eps ai
- 10 бесплатных фонов psd
- Бесплатная кофейная кружка MockUp psd
- Contact Us
Бесплатная и доступная программа для создания векторной графики
Дизайн векторной графики слишком долго был недоступен для блоггеров и контент-маркетологов: профессиональное программное обеспечение часто бывают завышенными и слишком сложными для непрофессионалов. Но не больше.
Разрешите представить вам Vectr. Vectr — новый бесплатный графический редактор, который можно использовать на рабочем столе или в веб-браузере для создания простой и понятной векторной графики. Инструмент позволяет создавать масштабируемые векторная графика с помощью простых и удобных в использовании инструментов; Считайте это урезанной версией Adobe Illustrator.
Вы спросите, что такое векторная графика? Векторная графика использует математические уравнения для рисования ваших дизайнов. Эти математические уравнения преобразуются в точки, которые соединяются линиями или кривыми, также известными как векторные пути, и они составляют все различные формы, которые вы видите на векторной графике. Векторная графика, в отличие от растровой, масштабируется и может использоваться для различных целей: для веб-дизайна, печати или иллюстраций.
В настоящее время Vectr представляет собой удобный инструмент для тех, кто только начинает работать с векторной графикой или имеет базовые потребности в программном обеспечении для обработки изображений.
Лично я счастлив использовать его для аннотирования изображений и создания макетов и диаграмм для своих историй. Однако Vectr также можно использовать для создания:
- Логотипы
- Водяные знаки
- Мокапы пользовательского интерфейса веб-сайта
- Баннеры в социальных сетях
- Иконки
- … И почти любой другой вид 2D-графики.
Теперь давайте подробно рассмотрим, как работает Vectr, и изучим его интерфейс. Приступая к работе с Vectr, первое, с чем вы столкнетесь, — это интерактивный набор руководств. Интерактивные руководства научат вас создавать и изменять контуры, вращать и масштабировать объекты, использовать инструменты рабочего пространства и управлять слоями вашего проекта.
Для начала просто загрузите или перетащите изображение в Vectr. Vectr позволяет импортировать EPS, AI, SVG, PNG или Файлы JPEG — что упрощает переход с других платных программ, таких как Adobe Illustrator.
Интерфейс аккуратно организован и не утомляет новичков несущественными инструментами и функциями. Вкладки страниц и слоев в левом верхнем углу позволяют управлять своими проектами, а панель фильтров расположена в правой части интерфейса. Вы можете оживить графику градиентами, изменить непрозрачность или добавить границы и тени.
Те из вас, кто только начинает заниматься дизайном векторной графики в целом, могут найти много знаний и практики в уроки векторного графического дизайна раздел. Команда Vectr шаг за шагом объясняет, как создавать большинство общих проектов.
Для блогеров и контент-маркетологов команда Vectr также подготовила специальный руководство по дизайну векторной графики. Практически охватывает самые важные темы, такие как типографика, теория цвета и основы графического дизайна.
Когда вы закончите проектирование, Vectr позволит вам экспортировать ваши проекты в форматы PNG, JPEG и SVG. Небольшая подсказка: SVG — это единственный действительно масштабируемый формат векторной графики, который можно открыть в других программах, в то время как PNG и JPEG подходят для Интернета.
Особенности совместной работыVectr также по-настоящему сотрудничает. У каждого дизайна есть уникальный URL-адрес, которым можно напрямую поделиться с друзьями или коллегами. Вы также можете публиковать свои проекты в Facebook или Twitter.
Команда также утверждает, что они создали мощный механизм совместной работы, который позволит профессиональным дизайнерам использовать возможности совместной работы в стиле Google-docs.
Читайте также: Как эти 6 отличных дизайнерских стратегий могут помочь вашему ведению блога4 тактики Surefire для создания красивой целевой страницыРынок и план развития на будущееСогласно информации Блог Vectr Этим летом они собираются запустить рынок дизайна. Очевидно, это позволит любому импортировать дизайны в Vectr одним щелчком мыши, а также зарабатывать деньги на продаже дизайнов.
На будущее дорожная карта продукта также есть такие функции, как встроенное управление версиями, смешивание, общедоступные профили и открытое сообщество пользователей. В конечном итоге кажется, что Vectr станет настраиваемым инструментом, который сможет использовать каждый в зависимости от уровня своих способностей.
В селе Верховино Юрьянского района социально значимые объекты получили бесплатный доступ в интернет » ГТРК Вятка
В Кировской области продолжается реализация проекта «Информационная инфраструктура» национальной программы «Цифровая экономика». В селе Верховино Юрьянского района появился бесплатный мобильный доступ во всемирную сеть, также к высокоскоростному интернету были подключены социально значимые объекты.В рамках нацпроекта в Кировской области за последние три года почти полторы тысячи социально значимых объекта были подключены к интернету.
АЛЕКСЕЙ СУХИХ, И.О. МИНИСТРА ИНФОРМАЦИОННЫХ ТЕХНОЛОГИЙ И СВЯЗИ КИРОВСКОЙ ОБЛАСТИ:
«На этом работа не останавливается поскольку задача развитие инфраструктуры связи, а без нее говорить о реализации остальных проектов, которые завязаны на цифре это неправильно. Поэтому инфраструктура будет развиваться. Сегодня в рамках поручения Президента стоит задача обеспечение широкополосным доступом к сети интернет домохозяйств РФ».
За три года операторы связи проделали большую работу по расширению доступности мобильной связи и интернета. Было проложено почти три тысячи километров волоконно-оптических линий связи, модернизировано и построено более семисот узлов связи.
ЕВГЕНИЙ ВАЛОВ, РУКОВОДИТЕЛЬ ОРГАНИЗАЦИИ ПОДРЯДЧИКА:
«Такой массовой стройки не помнят не мы и не старожилы. Данные нацпроекты толкнули развитие телекоммуникационной инфраструктуры на порядок».
Нина Перетягина — заведующая ФАПом в селе Верховино. Раньше, чтобы выписать направление, приходилось звонить в медицинские учреждения и получать необходимую информацию. Сегодня с приходом интернета появилась возможность подключиться к единым медицинским базам, что значительно облегчает работу фельдшера на селе.
НИНА ПЕРЕТЯГИНА, ЗАВЕДУЩАЯ-ФЕЛЬДШЕР ФАП С. ВЕРХОВИНО ЮРЬЯНСКОГО РАЙОНА:
«Удобства будут. Вот они сдали анализы, в Юрью съездили. Здесь можно посмотреть по компьютеру какие анализы. направления выписывать».
Появление высокоскоростного интернета оценили в местной школе. У детей и педагогов помимо библиотеки появилась возможность получать и находить нужную информацию по учебному процессу, смотреть и скачивать видео уроки.
НАТАЛЬЯ ЯРОПОЛОВА, ЗАВЕДУЮЩАЯ НАЧАЛЬНОЙ ШКОЛОЙ С. ВЕРХОВИНО ЮРЬЯНСКОГО РАЙОНА:
«Если раньше у нас скорость интернета была очень маленькая и загрузка шла час, два, то сейчас это в течение нескольких минут».
Реализация национальной программы «Цифровая экономика» имеет огромное значение. Поскольку без обеспечения технической возможности передачи данных нельзя говорить о развитии дистанционного образования, телемедицины и каких бы то ни было электронных сервисов.
Бесплатное онлайн-приложение для векторизации изображений SVG
Веб-приложение Векторизатор Изображений предназначено для преобразования растровых изображений JPG, PNG, BMP, TIFF, ICO и GIF в векторную графику на основе фигур, состоящих из кривых и линий Безье. Все элементы векторной графики после преобразования сохраняются в файл SVG.
Aspose.SVG предлагает бесплатный Векторизатор Изображений работающий на любой платформе. Используя это приложение, вы можете применить набор параметров для достижения идеального результата. Сэкономьте свое время и воспользуйтесь Векторизатором Изображений, чтобы получить все преимущества векторной графики!
Векторизатор Изображений предлагает различные варианты предварительной обработки рисунков перед сохранением их в векторном формате. Обработка предполагает управление следующими параметрами: «Палитра», «Максимальное количество цветов», «Сглаживание», «Закругленность», «Подавление шума» и «Обводка и Ширина».
Палитра предлагает контроль и управление цветами:
Максимальное количество цветов позволяет регулировать набор необходимых цветов. С помощью этого элемента управления вы можете изменить какой-либо цвет и, при необходимости, добавить / удалить цвет.
Сглаживание позволяет получить менее пиксельное изображение и улучшить цветовые переходы.
Закругленность содержит контроль округлости границ. Меньшие значения дают более острые углы, большие значения дают более гладкие углы.
Подавление шума используется для уменьшения шума и нежелательных точек или пятнышек на изображении.
Обводка и Ширина позволяет создать контурное изображение с выбранной шириной обводки и цветом.
Зачем нужна векторизация изображений?
В растровом изображении каждый объект представлен набором пикселей. Растровые форматы хорошо подходят для фотографий или картинок с цветовыми градиентами. Но одним из главных их недостатков является потеря качества при масштабировании. Векторная графика позволяет масштабировать изображение до любого размера без потери качества, а иногда — значительно уменьшить размер файла. Лучше всего для векторного формата подходят логотипы, иконки, макеты страниц, карты, графики, штриховые рисунки, иллюстрации и т.tyre_background_video}}
{{#tyre_background_image}}
{{/tyre_background_image}}
{{/tyre_background_video}}
{{#link}}{{/link}}
{{/item}}
Марка МаркаABARTHACACURAAIWAYSAIXAMALFA ROMEOALPINAALPINEAMCAROARTEGAASIA MOTORSASTON MARTINAUDIAUSTINAUSTIN-HEALEYAUTO UNIONAUTOBIANCHIAVIABARKASBAWBEDFORDBENTLEYBERTONEBESTURN (FAW)BITTERBMWBOGDANBONDBORGWARDBRILLIANCEBRISTOLBUGATTIBUICKBYDCADILLACCALLAWAYCARBODIESCATERHAMCHANGANCHANGFENGCHECKERCHERYCHEVROLETCHRYSLERCITROËNCMCCUPRADACIADAEWOODAFDAIHATSUDAIMLERDALLASDATSUNDE LOREANDE TOMASODERWAYSDODGEDONKERVOORTDRDSEMGRANDENGLONFAWFAW (TIANJIN)FENGSHENFERRARIFIATFISKERFORDFORD AUSTRALIAFORD OTOSANFORD USAFOTONFSOGAZGEELYGENESISGEOGINETTAGIOTTI VICTORIAGLASGMCGONOWGONOW (GAC)GOUPILGREAT WALLHAFEIHAIMA (FAW)HAIMA (ZHENGZHOU)HAVALHAWTAIHINDUSTANHOBBYCARHONDAHONDA (GAC)HUANGHAIHUMMERHYUNDAIINDIGOINFINITIINNOCENTIIRAN KHODROIRMSCHERISDERAISUZUIVECOIZHJACJAGUARJEEPJENSENJMCKIAKTMLADALAMBORGHINILANCIALAND ROVERLANDWIND (JMC)LDVLEXUSLIFANLIGIERLINCOLNLOTUSLTILUXGENMAHINDRAMANMARCOSMASERATIMAXUSMAYBACHMAZDAMCLARENMEGAMERCEDES-BENZMETROCABMGMG (SAIC)MICROCARMIDDLEBRIDGEMINELLIMINIMITSUBISHIMITSUOKAMORGANMORRISMOSKVICHMPM MOTORSNISSANNISSAN (DFAC)NSUOLDSMOBILEOLTCITOPELOSCAPANOZPANTHERPEUGEOTPIAGGIOPININFARINAPLYMOUTHPOLESTARPONTIACPORSCHEPREMIERPROTONPUCHRAMRANGERRAVONRAYTON FISSORERELIANTRENAULTRENAULT TRUCKSRILEYROLLS-ROYCEROVERRUFSAABSAMSUNGSANTANASEATSEAZSEVICSHELBYSHUANGHUANSIPANISKODASMARTSPECTRESPYKERSSANGYONGSTANDARD AUTOMOBILESTEYRSTREETSCOOTERSUBARUSUZUKITAGAZTALBOTTATATAZZARITESLATHINKTOFASTOYOTATOYOTA (FAW)TOYOTA (GAC)TRABANTTRIUMPHTVRUAZUMMUZ-DAEWOOVAUXHALLVECTORVOLVOVORTEXVWWARTBURGWESTFIELDWIESMANNWOLSELEYYUGOYULONZASTAVAZAZZHONGHUA (BRILLIANCE)ZHONGXING (ZX AUTO)ZILZOTYEZUENDAPP
Год выпуска Год выпуска
Модель Модель
Двигатель (опционально) Двигатель
Ширина Ширина
Высота Высота
Диаметр Диаметр
Как определить типоразмер Ваших шин
Типоразмер шин, которые подходят вашему автомобилю, обозначается набором цифр и букв, например, 205/55 R 16 94 V XL. Уточнить правильный типоразмер можно на боковине используемого комплекта шин или в руководстве по эксплуатации автомобиля.
- Ширина Например 205
- Высота Например 55
- Диаметр Например 16
Поиск шин по типу автомобиля
Безопасность нового уровня
Что безопасность означает для вас? Безопасность для нас — это жить и учиться, заботиться друг о друге и относиться с уважением к миру, в котором мы живем. Нам важно создавать более безопасный мир в том числе и для будущих поколений. Мы с гордостью представляем новые шипованные шины Nokian Hakkapeliitta 10p.
Легковые шины, шины для внедорожников или электромобилей? Выбирайте те, которые подходят вам!
Для легковых автомобилей
Для внедорожников
Для максимального акустического комфорта
официальный маркетплейс nokian tyres
Marketplace.nokiantyres.ru — это официальный маркетплейс бренда Nokian Tyres, ведущего производителя шин в России. Мы предоставляем широчайший выбор шин Nokian Tyres, возможность заказа шин на сайте производителя через проверенных поставщиков, быструю обработку заказа и круглосуточную поддержку контакт-центра. На маркетплейсе вы можете забронировать удобную дату получения шин и записаться на шиномонтаж онлайн.
ШИНОМОНТАЖ В ПОДАРОК ПРИ ПОКУПКЕ 4 ШИН NOKIAN TYRES
Выгодное предложение от Nokian Tyres! Купите шины для Вашего автомобиля и получите шиномонтаж бесплатно. Сроки акции ограничены.
Условия акции, количество подарков, сроки, место и порядок их получения, перечень моделей-участников акции уточняйте в торговых точках.
расширенная гарантия
заменим поврежденную шину бесплатно
Вы приобретаете шину Nokian Tyres c Расширенной гарантией – мы меняем ее бесплатно при случайном повреждении!
Победы в тестах
Шины Nokian Tyres — неоднократные победители сравнительных независимых тестов. Доверьтесь мнению профессионалов при выборе Ваших новых шин!
Отзывы о шинах Nokian Tyres
Есть опыт эксплуатации шин Nokian Tyres? Поделитесь своим мнением — оставьте отзыв!
Стоите перед выбором шин? Ознакомьтесь с отзывами других автовладельцев!
Чем мы можем Вам помочь?
Если Вам нужна помощь, свяжитесь с нами по телефону круглосуточной горячей линии +7 800 250 88 50 (звонок бесплатный) или по электронной почте — [email protected]
Также Вы можете попробовать найти ответ на Ваш вопрос в разделе часто задаваемых вопросов.
Часто задаваемые вопросы
Почему Nokian Tyres?
Благодаря высочайшему качеству, передовым технологиям и непрерывной работе сотен профессионалов шины Nokian Tyres обеспечивают надежность, эффективность и уверенность на дороге в любых погодных условиях — от зимних метелей до летних ливней.
Где купить шины Nokian Tyres?
«Феномены настоящего и будущего» — первая книга Алексея Королюка, серийного предпринимателя и сооснователя REG.RU
| ПоделитьсяВ свет вышла книга «Феномены настоящего и будущего» Алексея Королюка. Автор — серийный предприниматель, сооснователь хостинг-провайдера и регистратора доменов REG.RU, венчурный и профессиональный инвестор в ценные бумаги.
В книге изложены все накопленные знания, размышления Алексея Королюка о влиянии технологий на развитие человечества. «Феномены настоящего и будущего» — это пособие для всех, кто хочет сориентироваться в быстро меняющемся мире. В своих эссе автор предлагает поразмышлять и найти собственный вектор развития для жизни, карьеры, бизнеса.
Книга представляет собой сборник размышлений о будущем, где каждое эссе описывает один из интригующих современных феноменов и то, как он может повлиять на будущее:
- интернет людей (Internet of Person) и нейроинтерфейсы;
- нейросети и искусственный интеллект;
- цифровое изгнание;
- зависимость от гаджетов и технологий;
- фейкньюс и цифровые двойники;
- роботизация всех сфер и другие.
Книга уже получила положительные отзывы отраслевого и бизнес-сообщества.
«Книга Алексея — это энциклопедия современного мира, технологических трендов, социокультурных изменений, происходящих в нашем обществе. Она охватывает основные сферы жизни, позволяет заглянуть за горизонт событий и явлений, которые случатся с человечеством в отдалённом или не очень будущем. Книга важна и полезна всем тем, кто хочет понимать существующее состояние технологий и решений, зарождающиеся тренды и фундаментальные предпосылки, которыми они обусловлены», — говорит Владимир Волобуев, технологический предприниматель, сооснователь и директор MyGenetics.
Получить книгу бесплатно в электронном формате можно на лендинге: https://future.reg.ru/.
Алексей Королюк — серийный предприниматель, и сооснователь хостинг-провайдера и регистратора доменов REG.RU, венчурный и профессиональный инвестор в ценные бумаги. Авторитетный эксперт крупнейших СМИ России, спикер отраслевых мероприятий, участник законотворческих процессов, эксперт комитета Госдумы по информационной политике, информационным технологиям и связи. Популяризатор Data science и AI, исследователь футуристических идей.
REG.RU — хостинг-провайдер и аккредитованный регистратор доменных имён №1 в России (по данным StatOnline.ru, занимает первое место по количеству зарегистрированных доменов и размещённых сайтов в .RU и .РФ). Компания работает с 2006 года и в мае 2021 года отметила своё 15-летие. Сегодня обслуживает более 3300000 доменов, услугами пользуются 2200000 клиентов, среди которых Mail.ru Group, Avito, Газпром-медиа Холдинг, Первый Бит. Каждый второй домен в Рунете регистрируется в REG.RU. Компания предлагает регистрацию в 750 международных доменных зонах, а также предоставляет услуги хостинга, SSL, почты, VPS, аренды физических серверов.
Официальные аккаунты REG.RU в соцсетях: instagram.com/regru, vk.com/regru, facebook.com/REG.RU, t.me/regru, twitter.com/regru, youtube.com/user/regruvideo.
Vector для iPhone Бесплатно в App Store
Лучшая игра в жанре паркур для iOS теперь БЕСПЛАТНА! Vector позволяет вам вырваться на свободу и бежать! Не попадитесь!
— = Пресса любит вектор! = —
***** Топ-3 грядущих игр для устройств iOS… Было бы здорово сыграть в эту игру на Retina Display нового iPad »- Siliconeindia.com — *****
**** * То, как Vector имитирует движения реальных практиков паркура, впечатляет… [Я] не могу дождаться, когда меня поймают в многообещающую смесь направления и величины Vector.”- appadvice.com — *****
***** Vector захватывающий, богатый разнообразием, он напоминает нам Stick Run, но предлагает гораздо более сложные анимации». — fbgamer.de — *****
***** Единственный крутой способ убежать от всех ваших проблем ». — Gamezebo.com *****
***** Игра выглядит потрясающе… »- idroidplay.com — *****
— = Узнайте, что игроки говорят о Vector! = —
«Потрясающе!», «Вау! Идеальная игра, чувак», «Самая лучшая игра, в которой я когда-либо пробовал !!!», «Уууу! 5 звезд!»…
— = Что такое вектор? = —
Vector — это увлекательная аркадная игра, в которой вы будете исключительным свободным бегуном, которого система не сдерживает. Игра открывается видом в тоталитарный мир, где свобода и индивидуальность — не более чем далекая мечта. Но сердце фрираннера сильно, и ты скоро вырвешься на свободу. Бегите, прыгайте, скользите и карабкайтесь, используя необычные приемы, основанные на паркуре, связанном с городским спортом ниндзя, и все это время преследует «Большой Брат», единственная цель которого — поймать вас и вернуть обратно.
Вдохновленный практикой и принципами паркура, интуитивно понятное управление Vector порадует игроков всех уровней, а сложный дизайн уровней бросает вызов самым требовательным игрокам, решая быстро меняющиеся временные головоломки, когда трейсер «плывет» по мрачным крышам.
— = Особенности игры = —
— Аркадный геймплей от создателей популярной игры для Facebook
— Поразительно реалистичные движения, вдохновленные паркуром, стали возможны благодаря инструментам анимации Cascadeur
— Потрясающие, сложные уровни, все больше и больше добавляются с каждое обновление
— Быстро учиться, сложно освоить
— Также доступно для iPhone и Facebook!
Скачатьстоковых векторных изображений, клип-артов и значков в формате SVG.
ВекторПортал
- Блог
- Справка
- Около
- Часто задаваемые вопросы
- Пресс
- Авторство
- en
- es
- fr
- де
- pt
- RU
- Это
- tr
- св
- нл
- ро
- pl
- нет
- Животные
- Фоны
- Машины и Мотоциклы
- Рождество
- Картинки
- Дополнительно
- Флаги и карты
- Цветочный
- Еда и напитки
- Иконки
- Шаблоны Illustrator
- Элементы логотипа
- Военные и оружие
- Музыка
- Люди
- Религиозный
- Силуэты
- Черепа
- Спортивный
- Спортивные логотипы
- Стоковые векторы
- Символы и знаки
- Технология
- Племенной
Голова дракона
Посмотреть и скачать
Фейерверк Ракета
Посмотреть и скачать
Рогатка
Посмотреть и скачать
Глазированные пончики
Посмотреть и скачать
Метроном
Посмотреть и скачать
Игла шприца
Посмотреть и скачать
Сумки для покупок
Посмотреть и скачать
Чаша с лапшой
Посмотреть и скачать
Микрофон
Посмотреть и скачать
Рукописное письмо
Посмотреть и скачать
Контроллер видеоигр
Посмотреть и скачать
Коктейльные напитки
Посмотреть и скачать
Кубик Рубика
Посмотреть и скачать
Бутылки Лака Для Ногтей
Посмотреть и скачать
Круассан и кофе
Посмотреть и скачать
Волшебная шляпа
Посмотреть и скачать
Голова льва
Посмотреть и скачать
Молния Череп
Посмотреть и скачать
Книжная полка
Посмотреть и скачать
Голова орла
Посмотреть и скачать
Загрузить больше результатов- Блог
- Справка
- Около
- Часто задаваемые вопросы
- Пресс
- Авторство
- en
- es
- fr
- де
- pt
- RU
- Это
- tr
- св
- нл
- ро
- pl
- нет
Безвекторная микрофлюидная платформа для внутриклеточной доставки
Abstract
Внутриклеточная доставка макромолекул является сложной задачей в исследованиях и терапевтических приложениях.Существующие векторные и физические методы имеют ограничения, в том числе их зависимость от экзогенных материалов или электрических полей, которые могут привести к токсичности или нецелевым эффектам. Мы описываем микрофлюидный подход к доставке, при котором клетки механически деформируются, поскольку они проходят через сужение, которое на 30–80% меньше диаметра клетки. В результате контролируемое приложение сил сжатия и сдвига приводит к образованию временных отверстий, которые обеспечивают диффузию материала из окружающего буфера в цитозоль.Этот метод продемонстрировал способность доставлять ряд материалов, таких как углеродные нанотрубки, белки и миРНК, к 11 типам клеток, включая эмбриональные стволовые клетки и иммунные клетки. При использовании для доставки факторов транскрипции микрофлюидные устройства обеспечивали 10-кратное улучшение образования колоний по сравнению с электропорацией и проникающими в клетки пептидами. Действительно, его способность доставлять структурно разнообразные материалы и его применимость к трудно трансфицируемым первичным клеткам указывает на то, что этот метод потенциально может сделать возможным множество исследований и клинических применений.
Внутриклеточная доставка макромолекул — важный шаг в терапевтических и исследовательских приложениях. Например, доставка ДНК и РНК, опосредованная наночастицами, изучается для генной терапии (1, 2), в то время как доставка белка является многообещающим средством воздействия на клеточную функцию как в клинических (3), так и в лабораторных (4) условиях. Другие материалы, такие как небольшие молекулы, квантовые точки или наночастицы золота, представляют интерес для лечения рака (5, 6), внутриклеточного мечения (7, 8) и отслеживания одиночных молекул (9).
Клеточная мембрана в значительной степени непроницаема для макромолекул. Во многих существующих методах используются полимерные наночастицы (10, 11), липосомы (12) или химические модификации молекулы-мишени (13), такие как проникающие в клетки пептиды (CPP) (14, 15), для облегчения порообразования в мембране или эндоцитотической доставки. . В этих методах эффективность средства доставки часто зависит от структуры молекулы-мишени и типа клетки. Таким образом, эти методы эффективны для доставки структурно однородных материалов, таких как нуклеиновые кислоты, но часто не подходят для доставки более структурно разнообразных материалов, таких как белки (16, 17) и некоторые наноматериалы (7).Более того, механизм выхода из эндосом, на который полагается большинство этих методов, часто неэффективен; следовательно, много материала остается в эндосомальных и лизосомных пузырьках (18). Однако более эффективные методы доставки генов, такие как вирусные векторы (19, 20), часто сопряжены с риском хромосомной интеграции и ограничиваются доставкой ДНК и РНК.
Методы мембранной порации, такие как электропорация (21, 22) и сонопорация (23), являются привлекательной альтернативой в некоторых приложениях. Действительно, электропорация продемонстрировала свою эффективность в ряде приложений доставки ДНК (24) и РНК (25) для первичных клеток, которые ранее трудно было трансфектировать.Однако этот метод может вызвать гибель клеток и, как было показано, повредить чувствительные материалы, такие как квантовые точки, которые собираются из-за воздействия электрических полей (8). Имеются также ограниченные сообщения об успешной доставке белка с помощью этого механизма (26, 27). Микроинъекция, возможно, является наиболее прямым методом доставки материала в цитоплазму клетки, независимо от типа клетки или материала для доставки. Несмотря на то, что этот метод эффективен для определенных применений, таких как получение трансгенных организмов, его низкая производительность является недостатком во многих терапевтических и исследовательских приложениях (28, 29).
В этой статье мы описываем метод цитозольной доставки, основанный на быстрой механической деформации клетки, вызывающей временные разрушения мембраны, которые способствуют пассивной диффузии материала в цитозоль клетки. Этот метод был разработан с целью доставки практически любой интересующей макромолекулы практически к любому типу клеток с высокой пропускной способностью. Хотя методы загрузки со скребком и доставки на основе сдвига были продемонстрированы ранее, они не подходят для некоторых приложений из-за низкой жизнеспособности и / или эффективности доставки (30–32).Однако такие способы доставки, основанные на повреждении / диффузии, действительно имеют преимущество высокой пропускной способности (по сравнению с микроинъекцией) и независимости от экзогенных материалов или полей. Предлагаемый нами метод отличается от предыдущих методов, поскольку он использует физическое сужение для деформации и сдвига клеток контролируемым, воспроизводимым образом, таким образом сводя к минимуму гибель клеток, позволяя при этом оптимизировать эффективность доставки. В отличие от вышеупомянутых способов доставки, этот подход не полагается на электрические поля, экзогенные материалы, эндоцитоз или химическую модификацию молекулы-мишени.Наши данные показывают, что этот метод может быть особенно полезным для применений, связанных с наноматериалами, белками или типами клеток, которые трудно трансфицировать, такими как иммунные клетки и стволовые клетки, — все из которых часто недостаточно обслуживаются современными методами.
Результаты
Способ доставки.
Мы предполагаем, что быстрая механическая деформация клетки, когда она проходит через сужение с минимальным размером меньше диаметра клетки, приводит к образованию временных разрывов мембраны или отверстий (рис.1 А ). Размер и частота этих отверстий будут зависеть от сил сдвига и сжатия, испытываемых ячейкой во время прохождения через сужение. Материал из окружающей среды может затем диффундировать непосредственно в цитозоль клетки на протяжении всего срока службы этих отверстий. Такой подход теоретически может позволить диффузионную доставку любой макромолекулы, достаточно маленькой, чтобы пройти через отверстия. Для реализации этого подхода мы создали семейство микрожидкостных устройств с различными размерами сужений и количеством сужений в серии.
Рис. 1.Механизм подачи и конструкция системы. ( A ) Иллюстрация гипотезы доставки, согласно которой быстрая деформация клетки, когда она проходит через микрожидкостное сужение, создает временные отверстия в мембране. Включает электронную микрофотографию текущего дизайна параллельного канала с синими ячейками в качестве иллюстрации. ( B ) Изображение готового устройства, состоящего из пирекса, связанного с силиконом для герметизации. (Шкала: 2 мм.) ( C ) Иллюстрация процедуры доставки, в которой клетки и материал доставки смешиваются во входном резервуаре, проходят через чип и собираются в выходном резервуаре.Система крепления состоит из деталей из нержавеющей стали и алюминия, соединенных с микросхемой инертными уплотнительными кольцами. (Масштаб: 10 мм.)
Каждое устройство (Рис. 1 B ) состоит из 45 идентичных параллельных микрофлюидных каналов, содержащих одно или несколько сужений, протравленных на кремниевом чипе и герметизированных слоем Pyrex. Ширина и длина каждого сужения (обозначенного на рис. S1) колеблются от 4 до 8 мкм и от 10 до 40 мкм, соответственно. Текущая конструкция обычно работает с пропускной способностью 20 000 ячеек / с, что дает около 1 миллиона обработанных ячеек на устройство до выхода из строя из-за засорения.Конструкция параллельных каналов была выбрана для увеличения пропускной способности при обеспечении равномерной обработки ячеек, поскольку любое засорение или дефекты в одном канале не могут повлиять на скорость потока в соседних каналах (устройство работает при постоянном давлении). Перед использованием устройство сначала подключается к стальному интерфейсу (рис. 1 C ), который соединяет входной и выходной резервуары с кремниевым устройством. Затем смесь клеток и желаемого материала для доставки помещается во входной резервуар, и ко входу присоединяется тефлоновая трубка.Затем используется регулятор давления для регулировки давления во входном резервуаре и пропускания ячеек через устройство. Обработанные клетки собирают из выпускного резервуара.
Управляющие параметры.
Мы определили скорость клетки, размеры сужения и количество сужений как три параметра, которые влияют на эффективность доставки (определяемую как доля живых клеток, которые получают доставляемый материал; рис. S1), изменяя скорость сдвига и сжатия, испытываемую клетками. .Например, эффективность доставки непроницаемых для мембран, меченных Cascade Blue 3-кДа молекул декстрана в живые клетки HeLa монотонно возрастает со скоростью клетки при различных конструкциях сужения (рис. 2 A ). Размеры сужения также влияют на доставку; увеличение длины сужения с 20 до 40 мкм почти удвоило эффективность доставки на всех рабочих скоростях (рис. 2 A ) с минимальным влиянием на жизнеспособность (рис. 2 B ). Аналогичный эффект имело уменьшение ширины перетяжки (рис.S2 A ). Увеличение количества сужений в серии также увеличило эффективность доставки, так что устройство с пятью сужениями длиной 10 мкм, включенными последовательно, превзошло конструкцию с одиночной длиной 10, 20 или 40 мкм на всех скоростях ячейки (рис.2 A и B ). Можно также обрабатывать клетки несколько раз, используя одно и то же устройство для улучшения доставки, хотя это может привести к значительной потере жизнеспособности. В этих данных точки данных 0 мм / с соответствуют нашему контрольному случаю, когда клетки подвергаются той же обработке, что и другие образцы, но не проходят через устройство, что отражает любые эффекты эндоцитотического или поверхностного связывания.
Рис. 2.Производительность доставки зависит от скорости ячейки и конструкции сужения. Размеры сужения (рис. S1) обозначаются числами (например, 10 мкм — 6 мкм × 5), так что первое число соответствует длине сужения, второе — ширине сужения, а третье (если имеется) — количеству сужений в серия на канал. ( A ) Эффективность доставки и жизнеспособность клеток ( B ) через 18 часов после обработки в зависимости от скорости клеток для 40–6 мкм (○), 20–6 мкм (□) и 10–6 мкм. × 5 (∆) конструкций устройства.Эффективность и жизнеспособность измеряли с помощью проточной цитометрии после окрашивания пропидиум йодидом. Для получения информации о скорости восстановления ячеек см. SI Note S1 . Все точки данных были обработаны в трех экземплярах, а столбцы ошибок представляют 2 стандартных отклонения.
Цитозольная доставка диффузией.
Поскольку предполагается, что большинство современных методов доставки на основе наночастиц и СРР используют эндоцитотические пути (33), мы стремились исключить влияние эндоцитоза в нашем механизме доставки.Конфокальная микроскопия клеток, обработанных 3-кДа декстраном, конъюгированным с Cascade Blue, демонстрирует диффузное цитозольное окрашивание (рис. 3 A ) в отличие от точечной характеристики, которую можно ожидать от эндоцитотических методов (7). Более того, когда эксперименты по доставке проводятся при 4 ° C, температуре, при которой эндоцитоз минимален (34), эффективность доставки минимально зависит от температуры как для 3-, так и для 70-кДа декстрана (рис. S2 B ). Эти данные указывают на то, что эндоцитоз вряд ли отвечает за доставку в этой системе.
Рис. 3.Механизм диффузионной доставки. ( A ) Сканирование различных горизонтальных плоскостей клетки HeLa после доставки 3-кДа-декстрана, конъюгированного с Cascade Blue, при измерении с помощью конфокальной микроскопии. Обратите внимание, что декстран 3 кДа достаточно мал, чтобы проникнуть в ядерную оболочку (43). Сканы читаются сверху вниз, а затем слева направо, где верхний левый угол соответствует z = 6,98 мкм, а нижний правый угол — z = -6,7 мкм. (Шкала: 6 мкм.) ( B ) Эффективность доставки живых клеток 10 мкм — 6 мкм (□), 20 мкм — 6 мкм (○), 30 мкм — 6 мкм (∆) и 40 мкм — Устройства 6 мкм (◇).На оси времени указано количество времени, прошедшее от начальной обработки клеток до того, как они подверглись действию раствора для доставки мишени. Все результаты были измерены методом проточной цитометрии через 18 часов после обработки. ( C ) Средняя интенсивность доставленной популяции клеток, нормализованная по необработанным клеткам для контроля аутофлуоресценции. Конъюгированный с флуоресцеином 70-кДа-декстран и 3-кДа-декстран, конъюгированный с Cascade Blue, доставляются в клетку (циклы 1 и 3) и удаляются из клетки (цикл 2) в последовательных циклах обработки.Контроль представляет собой клетки, которые подвергались только воздействию раствора для доставки и не обрабатывались устройством. ( D ) Нокдаун гена в зависимости от типа устройства и скорости клеток в живых дестабилизированных GFP-экспрессирующих клетках HeLa через 18 ч после доставки миРНК против eGFP в концентрации доставки 5 мкМ. Липофектамин 2000 использовали в качестве положительного контроля, а скремблированные контроли обрабатывали со скоростью 500 мм / с на 10–6 мкм × 5. Все точки данных обрабатывались в трех экземплярах, а столбики ошибок представляют 2 стандартных отклонения.
Чтобы проверить нашу гипотезу о диффузной доставке, мы охарактеризовали кинетику доставки во времени. В этом эксперименте клетки обрабатывали устройством в отсутствие материала для доставки, а затем подвергали воздействию декстрана 3 кДа, меченного Cascade Blue, через определенные интервалы времени после обработки. Результаты показывают, что 70–90% родов происходит в течение первой минуты после лечения независимо от конструкции устройства (рис. 3 B ). Наблюдаемые временные рамки подтверждают гипотезу образования отверстий, поскольку в предыдущих работах по кинетике восстановления мембран сообщалось, что герметизация мембраны происходит примерно через 30 секунд после того, как повреждение было вызвано (35).
Если доставка материала через разрывы мембраны является диффузной, материал может перемещаться в ячейку и выходить из нее на протяжении всего срока службы отверстия. Чтобы продемонстрировать двунаправленный транспорт материала через клеточную мембрану, мы провели эксперимент, состоящий из трех циклов доставки. Клетки сначала обрабатывали в присутствии 3- и 70-кДа-декстрана (цикл 1), промывали PBS и снова обрабатывали в отсутствие декстрана (цикл 2) и, наконец, обрабатывали третий раз в присутствии 3- и 70-кДа. -kDa декстран (цикл 3).Изменения в нормализованной интенсивности флуоресценции демонстрируют чистую диффузию декстрана в клетки во время первого цикла, из клеток во время второго и обратно в течение третьего (фиг. 3 C ). Таким образом, эти результаты согласуются с гипотезой диффузной доставки.
В COMSOL была разработана упрощенная двумерная модель диффузии для моделирования пассивной диффузии материала в ячейку через пористую мембрану (рис. S3 и SI Note S1 ). Используя литературные значения коэффициента диффузии частиц внутри и вне цитоплазмы клетки (36), мы смогли качественно воссоздать экспериментальные результаты, показанные на рис.3 C с диффузией как единственным способом массопереноса. Более того, подгоняя наши экспериментальные данные к этой модели, мы оцениваем, что конечная концентрация материала доставки в цитозоле клетки находится в пределах 10-40% от концентрации буфера.
Кроме того, мы продемонстрировали функциональность доставляемых материалов, производя зависимую от дозировки, специфичную для последовательности, нокдаун флуоресценции в GFP-экспрессирующих клетках HeLa (фиг. 3 D и фиг. S2 C ). Хотя липофектамин 2000, коммерчески доступный реагент для трансфекции, достиг большей эффективности нокдауна, необходимо учитывать более длительный период доставки частиц липофектамина (клетки инкубировали в течение ночи) по сравнению с окном для порции устройства от 2 до 5 минут.Перед проведением этих экспериментов конструкция устройства и рабочие параметры не были оптимизированы для доставки миРНК.
Применимость для разных типов ячеек.
Чтобы исследовать универсальность метода, мы оценили его способность доставлять модельные молекулы декстрана к нескольким типам клеток, которые традиционно трудно трансфектировать, особенно к иммунным клеткам и стволовым клеткам. Для этих экспериментов был выбран флуоресцентно меченый декстран массой 70 и 3 кДа, поскольку они аналогичны по размеру многим молекулам белка и миРНК соответственно, легко обнаруживаются с помощью проточной цитометрии и обладают минимальным эффектом поверхностного связывания, поскольку они заряжены отрицательно.Используя различные конструкции устройств, мы смогли доставить молекулы декстрана к новорожденным фибробластам крайней плоти человека (NuFF) (рис. 4 A ), первичным дендритным клеткам мышей (рис. 4 B ) и эмбриональным стволовым клеткам (рис. 4). С ). Эти эксперименты показали минимальную потерю (<25%) жизнеспособности клеток (рис. 4 A – C ), а предварительные результаты на мышиных эмбриональных стволовых клетках показывают, что метод не вызывает дифференцировку (рис. S4). В дальнейших исследованиях мы выделили лейкоциты (слой лейкоцитов) из мышиной крови центрифугированием и обработали их с помощью устройства.В-клетки, Т-клетки и макрофаги, дифференцированные по окрашиванию антителами, показали успешную доставку декстрана как 3-, так и 70-кДа (фиг. 4 D и E и фиг. S5 – S7).
Рис. 4.Применимость для разных типов ячеек. ( A ) Эффективность доставки и жизнеспособность клеток NuFF, обработанных устройством 30–6 мкм для доставки 3- и 70-кДа декстрана. ( B ) Эффективность доставки и жизнеспособность выделенных из селезенки мышиных дендритных клеток, обработанных устройством 10–4 мкм для доставки 3- и 70-кДа декстрана.( C ) Эффективность доставки и жизнеспособность эмбриональных стволовых клеток мыши, обработанных устройством 10–6 мкм для доставки 3- и 70-кДа декстрана. ( D ) Эффективность доставки декстрана 3 кДа и ( E ) 70 кДа в В-клетки (CD19 + ), Т-клетки (TCR-β + ) и макрофаги (CD11b + ) выделен из цельной крови мышей центрифугированием и обработан приборами 30 мкм — 5 мкм и 30 мкм — 5 мкм × 5 при скорости 1000 мм / с. Декстран 3 и 70 кДа был помечен Cascade Blue и флуоресцеином соответственно.Все точки данных были обработаны в трех экземплярах, а столбцы ошибок представляют 2 стандартных отклонения.
Предварительные доказательства механизма доставки, основанного на порции и диффузии (рис. 3 A – C ) и функциональности доставляемых материалов (рис. 3 D ), указывают на то, что эти данные о доставке декстрана должны быть репрезентативными. ожидаемой эффективности цитозольной доставки интересующего белка или молекулы siRNA, которая имеет аналогичный размер. Конструкции устройств не были оптимизированы для любого из вышеупомянутых типов клеток, и поэтому мы ожидаем, что дальнейшие исследования дадут улучшение жизнеспособности и эффективности доставки.Список типов ячеек, которые были успешно обработаны с помощью этого метода, и рекомендации по разработке новых устройств для определенных типов ячеек см. В SI Text (Таблицы S1 и S2 и SI Note S2 ).
Включение платформы доставки.
Чтобы проиллюстрировать потенциал нашего метода в решении текущих проблем доставки, мы провели ряд экспериментов по проверке концепции в возможных приложениях, начиная от перепрограммирования клеток (4) и заканчивая зондированием на основе углеродных нанотрубок (37).В дополнение к материалам для конкретного применения, подробно описанным ниже, этот метод продемонстрировал успешную доставку плазмид Apolioprotein E, BSA и GFP.
Доставка 15-нм золотых наночастиц, покрытых PEG1000, была подтверждена с помощью туннельной электронной микроскопии (ТЕМ) клеток HeLa (рис. 5 A и B ). Наночастицы, по-видимому, в основном неагрегированы и явно не изолированы в эндосомах. На этих изображениях мы также наблюдали предварительные доказательства различных дефектов в цитоплазме клетки, которые могли быть предполагаемыми отверстиями, ответственными за доставку.Мы также продемонстрировали высокопроизводительную нецитотоксическую доставку квантовых точек непосредственно в цитозоль клетки (38) — цель, которую с трудом удается достичь с помощью современных методов. Кроме того, мы смогли проверить успешную доставку углеродных нанотрубок (37) (инкапсулированных олигонуклеотидом ДНК) с помощью проточной цитометрии (фиг. 5 C ) и рамановской спектроскопии (фиг. 5 D ). Антитела к тубулину также доставлялись (фиг. 5 E и F ) с использованием этого метода, что давало диффузное распределение по клетке, которое соответствовало бы цитозольной доставке.Вышеупомянутые материалы в настоящее время трудно доставить в цитозоль клетки, и каждый материал часто требует специальной модификации для облегчения доставки. В нашей работе все четыре материала были доставлены в клетки HeLa с использованием одного и того же набора условий на устройстве 10 мкм — 6 мкм × 5.
Рис. 5.Доставка наноматериала и антител. ( A и B ) ПЭМ-изображения наночастиц золота (некоторые указаны стрелками) в клетках, зафиксированных через ~ 1 с после обработки устройством 10 мкм — 6 мкм × 5 ( SI Note S3 ).(Масштаб: 500 нм.) ( C ) Эффективность доставки и жизнеспособность клеток HeLa, обработанных устройством 10 мкм — 6 мкм × 5 для доставки меченного Cascade Blue 3-кДа декстрана и меченного Cy5, обернутого ДНК, углеродные нанотрубки. ( D ) Светлопольные изображения клеток, наложенные с рамановским рассеянием в полосе G (красный), чтобы указать доставку углеродных нанотрубок в обработанные клетки ( слева, ) по сравнению с эндоцитозом ( справа, ). (Масштаб: 2 мкм.) ( E ) Флуоресцентная микрофотография клетки HeLa через 18 часов после доставки 3-кДа-декстрана, меченного Cascade Blue ( Центр ), и антител к тубулину с тегом Alexa Fluor 488 ( справа ).(Масштаб: 3 мкм.) ( F ) Эффективность доставки и жизнеспособность клеток HeLa, обработанных устройством 10 мкм — 6 мкм × 5, при 500 мм / с, для доставки меченных Alexa Fluor 488 антител к тубулину. Эффективность доставки при различных концентрациях антител сравнивают с контролем эндоцитоза при 100 мкг / мл и необработанных клетках.
Эффективная доставка белков к первичным клеткам может сделать возможным несколько терапевтических применений. Проблемой при перепрограммировании клеток (4), например, является неэффективность текущих методов доставки белка на основе CPP.Мы исследовали нашу способность доставлять четыре фактора транскрипции (Oct4, Sox2, c-Myc и Klf-4) к клеткам фибробластов человека и сравнили наши результаты с методом CPP (4) (рис. 6 A ). Наши результаты показывают, что помимо отсутствия зависимости от эндоцитоза, который может оставлять много материала в ловушке в эндосомах, доставка за счет быстрой механической деформации дает значительно более высокую эффективность доставки для всех четырех белков. Конфокальная визуализация клеток, обработанных устройством, показала, что факторы транскрипции, по-видимому, успешно локализуются в ядре (рис.6 В ). Наконец, чтобы изучить способность системы влиять на скорость транскрипции генов посредством доставки этих белков, мы частично воспроизвели предыдущее исследование перепрограммирования с использованием коммерчески доступных (Stemgent) рекомбинантных белков (39). Вкратце, клетки NuFF обрабатывали в присутствии рекомбинантных c-Myc, Klf4, Oct4 и Sox2 в течение четырех циклов с интервалом в 2 дня. За появлением трансформированных колоний следили в течение периода в 1 месяц после последней обработки (фиг. 6 C ).Устройство было способно генерировать в среднем 150 трансформированных колоний на чашку по сравнению с 11 и 2 колониями для электропорации и CPP, соответственно (фиг. S8). Эти колонии экспрессировали маркеры эмбриональных стволовых клеток, такие как Oct4, SSEA-4, Tra-1-60 и Tra-1-81, и были способны дифференцироваться во все три типа клеток зародышевого листка (рис. 6 D – G ). и рис. S8). Эти результаты предполагают, что факторы транскрипции, доставляемые микрофлюидным устройством, способны влиять на экспрессию гена / белка более эффективно, чем существующие альтернативы, такие как CPP и электропорация.
Рис. 6.Изменение морфологии клеток и экспрессии генов путем цитозольной доставки факторов транскрипции. ( A ) Вестерн-блоттинг доставки c-Myc, Klf4, Oct4 и Sox2 в клетки NuFF проникающими в клетки пептидами по сравнению с устройством 10–6 мкм. Каждый из четырех белков имеет дополнительные девять аргининовых (9R) групп для облегчения захвата. Столбцы с лизатом (Ly) соответствуют содержанию белка в промытых и лизированных клетках, тогда как столбцы со средой соответствуют содержанию белка в среде среды.( B ) Изображения клеток NuFF, зафиксированные после доставки факторов репрограммирования, с помощью конфокальной микроскопии. Белки маркируют с помощью конъюгированного с Alexa 488 антитела против FLAG, а ядро окрашивают с помощью DAPI. (Масштаб: 15 мкм.) ( C ) Развитие морфологических изменений от фибробластов к колониям. Белые стрелки указывают на потенциально трансформированные клетки. Красная стрелка указывает на сливающиеся клетки, образующие колонию. ( D – G ) Экспрессия маркера эмбриональных стволовых клеток человека Oct4, SSEA-4, Tra-1-60 и Tra-1-81 в трансформированных колониях ( SI Note S3 ).Там, где это уместно, в маленьком квадрате отображается контрастное пятно DAPI. (Масштаб: 100 мкм.)
Обсуждение
В предлагаемом методе внутриклеточной доставки мы предполагаем, что временные отверстия образуются в результате быстрой механической деформации клетки, когда она проходит через микрожидкостное сужение. Наши данные подтверждают это предположение, демонстрируя диффузное цитозольное окрашивание (фиг.3 A ), функциональность миРНК (фиг.3 D ) и двунаправленное движение материала через разрушенную мембрану (фиг.3 С ). Более того, этот эффект, по-видимому, применим к широкому спектру типов клеток (рис.4), особенно к тем, которые трудно лечить с помощью существующих методов, поскольку мы продемонстрировали успешную доставку в первичные фибробласты, эмбриональные стволовые клетки и ряд других клеток. иммунные клетки. В будущем, лучше понимая влияние сдвигающих и сжимающих сил в процессе деформации, можно потенциально создать семейство устройств, каждое из которых оптимизировано для определенного диапазона типов ячеек и приложений.
Этот механизм доставки обеспечивает ряд потенциальных преимуществ по сравнению с существующими методами. Подобно электропорации (22) и микроинъекции (28), это механизм, основанный на разрушении мембраны, и, следовательно, он не зависит от экзогенных материалов, химической модификации полезных нагрузок или эндоцитотических путей. Однако, в отличие от электропорации, она не зависит от электрических полей, которые имели ограниченный успех в доставке белка (26), могут повредить материал мишени (8), зависят от электрического заряда материала мишени (40) или вызывают цитотоксичность (21).Действительно, текущие результаты продемонстрировали относительно высокую жизнеспособность в большинстве приложений, и нет основного механизма, с помощью которого можно было бы повредить чувствительные полезные нагрузки, такие как квантовые точки или белки. Прямые сравнения с электропорацией и доставкой факторов транскрипции с помощью CPP дополнительно продемонстрировали преимущество системы в улучшении биологической активности.
Система могла бы стать инструментом исследования с ее способностью доставлять углеродные нанотрубки, наночастицы золота и антитела (рис.5) — три материала, которые сложно доставить с помощью современных технологий. Такие возможности значительно расширили бы возможности исследовательского сообщества исследовать внутриклеточные процессы, облегчая окрашивание структур / белков живых клеток антителами и квантовыми точками и позволяя использовать углеродные нанотрубки в качестве цитозольного молекулярного зонда или химического сенсора. В качестве надежного метода доставки белка он потенциально может быть использован для высокопроизводительного скрининга библиотек пептидов / белков, поскольку, в отличие от большинства методов, основанных на CPP или наночастицах, ожидается, что этот метод будет нечувствителен к структуре и химическому составу белка (41), не зависит от эндоцитотических путей (14) и не должен влиять на функциональность белка (16).Более того, возможно, что разрушение мембраны из-за быстрой механической деформации происходит in vivo в ответ на определенные стимулы или как часть заболевания. Следовательно, исследование этого явления может оказаться важным для лучшего понимания механизмов заболевания или физиологических реакций на травму.
В качестве инструмента исследования микрофлюидная основа нашего подхода позволит включить его в более крупную интегрированную систему, состоящую из нескольких модулей предварительной и последующей обработки. При нынешней средней пропускной способности 20000 клеток / с устройство можно, например, разместить в ряду с машиной для проточной цитометрии для сортировки клеток или выполнения других аналитических задач сразу после доставки.
Наконец, этот метод потенциально может открыть новые подходы к терапии (рис. 6). Можно представить себе подход, при котором клетки-мишени пациента выделяются из крови или другой ткани, обрабатываются устройством для доставки желаемого терапевтического средства и повторно вводятся в организм. Такой подход мог бы использовать преимущество потенциально увеличенной эффективности доставки терапевтических макромолекул и мог бы быть более безопасным, чем существующие методы, поскольку он устранял бы необходимость в потенциально токсичных векторных частицах и мог бы смягчить любые потенциальные побочные эффекты, связанные с ретикулоэндотелиальным клиренсом и доставкой вне мишени.
Заключение
Таким образом, мы подробно описали метод цитозольной доставки, который основан на быстрой механической деформации клетки, чтобы вызвать временное разрушение мембраны. Этот метод продемонстрировал возможность доставки широкого спектра материалов, некоторые из которых сложно использовать с помощью существующих методов, к различным типам клеток, которые трудно трансфицировать, включая стволовые клетки и иммунные клетки. Обеспечивая гибкость в применении и устраняя необходимость в экзогенных материалах или электрических полях, этот метод потенциально может открыть новые возможности для исследования и лечения заболеваний.Действительно, наша работа продемонстрировала способность этой системы доставлять углеродные нанотрубки, квантовые точки (38) и антитела к живым клеткам — приложения, которые могут позволить использовать новые методы зондирования и визуализации — и мы продемонстрировали превосходную производительность системы по сравнению с существующими методами. в таких приложениях, как доставка факторов транскрипции для перепрограммирования.
Материалы и методы
Изготовление устройства и система монтажа.
Устройства на основе кремния производятся на микротехническом предприятии Массачусетского технологического института с использованием фотолитографии и методов глубокого реактивного ионного травления.В этом процессе 6-дюймовые кремниевые пластины толщиной 450 мкм обрабатываются гексаметилдисилазаном, покрываются центрифугированием фоторезистом (OCG934; FujiFilm) в течение 60 с при 3000 об / мин, подвергаются воздействию УФ-света (EV1; EVG) через хромированную маску с конструкция канала сужения, разработанная в решении AZ405 (AZ Electronic Materials) за 100 с. После 20 мин запекания при 90 ° C пластина протравливается методом глубокого реактивного ионного травления (SPTS Technologies) на желаемую глубину (обычно 15 мкм). Процесс повторяется на противоположной стороне пластины (т.е.е. ту, которая не содержит протравленных каналов), используя другую маску, которая содержит шаблоны отверстий для доступа, и используя более толстый фоторезист AZ9260 (AZ Electronic Materials). Затем влажное окисление используется для выращивания 100–200 нм оксида кремния перед тем, как пластина анодно связывается с пластиной из пирекса и разрезается на отдельные устройства. Перед каждым экспериментом устройства визуально осматриваются и устанавливаются на держателе с впускным и выпускным резервуарами (все они разработаны собственными силами и произведены Firstcut). Эти резервуары соединяются с устройством с помощью уплотнительных колец Buna-N (McMaster-Carr) для обеспечения надлежащего уплотнения.Входной резервуар соединен с самодельной системой регулятора давления с помощью тефлоновой трубки для обеспечения необходимой движущей силы для проталкивания материала через устройство. Наша текущая система может работать только при давлении до 120 фунтов на квадратный дюйм.
Изоляция дендритных клеток.
Мышиные дендритные клетки выделяли из селезенки мышей BL6 (Taconic) с использованием CD11c-позитивной селективной сортировки MACS (Miltenyi Biotec).
Порядок доставки.
Для проведения эксперимента клетки сначала суспендируют в желаемом буфере для доставки [ростовая среда, PBS или PBS с добавлением 3% FBS и 1% F-68 Pluronics (Sigma)], смешивают с желаемым материалом для доставки и помещают во входном бачке устройства.Этот резервуар подключен к линии сжатого воздуха, управляемой регулятором, и выбранное давление (0–70 фунтов на квадратный дюйм) используется для подачи жидкости через устройство. Затем обработанные клетки собирают из выпускного резервуара. Клетки инкубируют при комнатной температуре в растворе для доставки в течение 5–20 минут после обработки, чтобы гарантировать закрытие лунок перед дальнейшей обработкой.
Доставка материалов.
Для доставки флуоресцентно меченных молекул декстрана (Invitrogen) эксперименты проводили, как описано выше, так что буфер для доставки содержал 0.1–0,3 мг / мл декстрана. Нокдаун GFP измеряется как процент снижения средней интенсивности флуоресценции популяции клеток по сравнению с необработанными контролями. Липофектамин 2000 плюс частицы миРНК получали объединением 1 мкг миРНК с 1 мкл реагента липофектамина 2000 в 100 мкл PBS.
Конфокальная микроскопия.
Конфокальные изображения были получены с использованием методов, описанных ранее (38).
Очистка фактора репрограммирования с помощью FLAG.
факторов репрограммирования с меткой FLAG (c-Myc, Klf4, Oct4 и Sox2) были созданы, как описано ранее (4).
Вестерн-блоттинг.
После обработки устройством клетки высевали на культуральный планшет. Через 4 часа культуральная среда, содержащая недоставленные белки, была собрана и обработана, как описано ранее (4).
Исследования доставки фактора транскрипции.
Мы воспроизвели процедуру доставки, проиллюстрированную предыдущей группой, для создания плюрипотентных стволовых клеток с использованием рекомбинантных белков с модификацией CPP (39). Вкратце, 10 5 клеток (на образец) обрабатывали устройством (30 мкм — 6 мкм при 500 мм / с) или системой трансфекции неона (Invitrogen) в присутствии 80 мкг / мл каждого фактора транскрипции (Stemgent). .Лечение повторяли каждые 2 дня со сменой среды каждый день, как описано ранее. После завершения обработки клетки переносили в среду mTeSR-1 (стволовые клетки), и подсчет колоний выполняли через 16–18 дней (корпус устройства) или 30–31 день (случаи нуклеофекции и CPP) после обработки. Разница во времени счета отражает более раннее появление колоний в корпусе прибора.
Рамановская спектроскопия.
Самодельная рамановская система использовалась, как описано ранее (42).
Благодарности
Мы благодарим Т. Шатову за полезное обсуждение плана экспериментов и анализа данных. Мы благодарим J. Naffin и профессора G. Petsko за их руководство в разработке / проведении экспериментов по доставке белка. Ники Уотсон из Института Уайтхеда помогала в получении изображений с помощью ПЭМ. Выражаем признательность за помощь и опыт Дж. Паради, персоналу центра проточной цитометрии в Институте Коха и сотрудникам Лаборатории микросистемных технологий Массачусетского технологического института.Эта работа была поддержана грантами Национального института здравоохранения RC1 EB011187-02, DE013023, DE016516, EB000351 и частично грантами поддержки (Core) онкологического центра Национального института рака P30-CA14051 и MPP-09Call-Langer-60.
Сноски
Вклад авторов: A.S., J.Z., A.A., M.-J.H., A.L.-J., P.A.B., K.-S.K., D.G.A., R.L. и K.F.J. спланированное исследование; A.S., J.Z., A.A., W.Y.S., N.C., E.J., S.M., S.S., M.-J.H., A.L.-J., P.A.B., S.J., J.W.K. и G.C.H. проведенное исследование; М.-J.H., J.L., D.A.H., J.W.K. и K.-S.K. внесены новые реагенты / аналитические инструменты; A.S., J.Z., N.C., E.J., S.S., M.-J.H., A.L.-J., D.A.H. и J.W.K. проанализированные данные; и A.S., R.L., and K.F.J. написал газету.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
↵ * Для этой статьи с прямым представлением был назначен редактор.
Эта статья содержит вспомогательную информацию на сайте www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.1218705110/-/DCSupplemental.
Полная коллекция [бесплатных] векторных пакетов — Smashing Magazine
Краткое резюме ↬ Дизайнеры любят подарки, которые облегчают жизнь и помогают создавать качественные работы.Бесплатные векторы полезны, бесплатные векторные пакеты тем более. К счастью, есть много талантливых графических дизайнеров, которые готовы поделиться своими работами (или их образцами), чтобы принести пользу всем нам. В этом посте мы представляем 60 лучших и наиболее полезных бесплатных векторных пакетов .
Дизайнеры любят подарки, которые облегчают жизнь и помогают создавать качественные работы.Бесплатные векторы полезны, бесплатные векторные пакеты тем более. К счастью, есть много талантливых графических дизайнеров, которые готовы поделиться своими работами (или их образцами), чтобы принести пользу всем нам. В этом посте мы представляем одни из лучших и наиболее полезных бесплатных векторных пакетов .
Многие из представленных здесь векторов могут быть полезны для определенных стилей, дизайна и конкретных типов веб-сайтов . Уделите несколько минут, чтобы просмотреть их, и вы можете найти что-то, что идеально подходит для текущего или будущего проекта.Прежде чем использовать какие-либо бесплатные предложения, обязательно проверьте лицензию, назначенную создателем, чтобы соответствовать указанным правилам.
Дополнительная литература по SmashingMag:
Завитки, цветы и круги
Мы рады выпустить набор векторной графики Swirls, Flowers and Circles, разработанный Пьеном Дуйверманом из Нидерландов. Векторная графика доступна для бесплатного скачивания и доступна в форматах AI (Adobe Illustrator CS3) и EPS (8.0). Загрузите набор бесплатно!
Больше после прыжка! Продолжить чтение ниже ↓Встречайте Image Optimization , новое практическое руководство Адди Османи по оптимизации и размещению в Интернете высококачественных изображений .От форматов и сжатия до доставки и обслуживания: все в одной книге 528 страниц .
Перейти к содержанию ↬Вы можете использовать набор для всех своих проектов бесплатно и без каких-либо ограничений. Вы можете свободно использовать его как для своих частных, так и для коммерческих проектов, включая программное обеспечение, онлайн-сервисы, шаблоны и темы. Иконки нельзя перепродавать, сублицензировать, сдавать в аренду, передавать или иным образом предоставлять для использования. Пожалуйста, дайте ссылку на эту статью, если вы хотите распространить информацию.
Волнистые векторные ленты Пакет из 7 модных векторов волнистых линий.
Модные круги Еще одна модная коллекция, состоящая из шести вариаций.
Кругов В этом паке есть разные типы и комбинации кругов.
Современные стрелы Простой способ добавить модный стиль в ваш дизайн.
Векторные линии, завитки и узоры Этот векторный пакет включает 20 различных линий и завитков.
Night Lights Набор из четырех векторов не в фокусе от Go Media.
Животные в сафари и зоопарках SpoonGraphics предлагает эту коллекцию из 20+ векторов наземных млекопитающих и водных организмов.
Векторный пакет динозавров Большой набор множества разных динозавров.
Птицы в полете Пакет из 12 векторов птиц от Bittbox.
Простая и милая векторная графика Twitter Bird Эти 8 векторов могут быть полезны блоггерам, которые публикуют обновления Twitter.
Иллюстрированная векторная графика для кроссовок Коллекция из 3 нарисованных вручную векторов от SpoonGraphics.
Декоративные орнаменты, нарисованные вручную Bittbox предоставляет этот декоративный векторный пакет.
Декоративные орнаменты, нарисованные вручную II Второй комплект от Bittbox.
Цветы Bittbox также предоставляет этот пакет цветочных векторов
Цветы Больше векторных цветов с большим разнообразием.
Листва Первый векторный набор листвы от Bittbox.
Листва, часть 2 Второй набор листвы от Bittbox.
Dotty Women Векторная графика Этот пакет включает 4 вектора.
Отпечатки пальцев Набор из 11 векторных изображений кончиков пальцев, отпечатков ладоней и полос от Go Media.
Векторный пакет Tower Это набор силуэтов знаменитых башен мира.
Векторные звезды В этот пакет включены несколько разных стилей звездных векторов.
Спортивный комплект Коллекция снаряжения и мячей из разных видов спорта.
сексуальные девушки векторов Пакет женских силуэтов.
Городская коллекция Большой набор различных векторов для городского дизайна.
Векторный пакетсамолетов Большой пакет векторных самолетов разных эпох.
Гранж фоторамки С помощью этих рамок вы легко добавите гранжевый элемент в свой дизайн.
векторные элементы гранж Еще один пакет для создания шероховатого дизайна.
Векторный пакет 70-х Ассортимент векторной графики в стиле 70-х.
Другие источники бесплатных векторов
Хотя этот пост посвящен векторным пакетам, вы можете найти отдельные векторные файлы (а также некоторые пакеты) на следующих веб-сайтах:
(al)бесплатных векторных файлов — FreePatternsArea
В эту категорию входят бесплатные векторные файлы, контурные шаблоны и файлы САПР с различными художественными рисунками.На всех страницах по ссылкам есть восемь различных форматов файлов для дизайнов, как для печати, так и для вырезания. Эти файлы можно бесплатно скачать для личного использования.
Изображения были нарисованы вручную в иллюстрациях или в программе CAD с использованием графического пера и планшетов на первом этапе. В результате этого первого этапа были получены векторные черно-белые графические файлы PNG, SVG и EPS. Позже траектории резания были созданы с использованием соответствующих технологий, чтобы эти конструкции можно было использовать в цифровых станках для резки с ЧПУ.Эти чертежи были сохранены как блоки 2D CAD в формате файлов DXF и DWG в конце этого этапа. Файлы формата CDR и PDF для печати были подготовлены с использованием полученных нами файлов DXF или DWG. На последнем этапе в программе 3D CAD были созданы файлы STL, которые представляют собой файлы предварительного просмотра 3D.
Таким образом, на страницах дизайна было опубликовано восемь бесплатных загружаемых форматов файлов каждого дизайна. Загрузите бесплатно нужный файл: векторное изображение силуэта, контурный рисунок или файл чертежа САПР.Наш сайт привлекает широкую аудиторию, которая использует наши дизайны для различных целей.Причина, по которой мы публикуем наши бесплатные дизайны в различных загружаемых форматах файлов, заключается в том, чтобы удовлетворить различные потребности аудитории.
Графические дизайнеры могут загружать масштабируемые файлы EPS и SVG для своих векторных изображений и открывать их в таких программах, как Corel Draw, Adobe Illustrator и Inkscape. Они могут загрузить прозрачный черно-белый графический файл PNG для использования в графическом программном обеспечении, таком как GIMP и Adobe Photoshop. Наши файлы PNG имеют высокое разрешение.Если вам нужны файлы цифровых шаблонов и шаблонов для резки и гравировки) на фрезерных станках с ЧПУ или станках для лазерной резки, вам подойдут файлы DXF, DWG и CDR.
Если вам нужны файлы шаблонов резки для использования на таких машинах, как Ciricut, силуэтная миниатюра, силуэтный портрет, плоттер, виниловый принтер и резак, устройство для изготовления трафаретов или наклеек, вы можете бесплатно загрузить файлы SVG и DXF на наших страницах дизайна.
ФайлыDWG и DXF содержат 2D-чертежи САПР. Если вам нужны блоки САПР для использования в таких программах, как Autocad, Draftsight, NanocCAD, вы можете загрузить эти файлы.
PDF-файлы содержат чертежи эскизов для печати.Если вам нужен файл шаблона схемы для использования в качестве поделки, раскраски, трафарета или шаблона татуировки, вы должны загрузить файлы шаблонов в формате PDF.
10 бесплатных источников данных ГИС: лучшие глобальные наборы растровых и векторных данных
10 бесплатных источников данных ГИС
Мы живем в век информации. Каждый день мы получаем огромное количество информации. С точки зрения бесплатных источников данных ГИС , это кажется бесконечным.
Вот почему мы составили этот список, чтобы ускорить ваш поиск надежных и бесплатных данных ГИС.
Другими словами: эти 10 бесплатных наборов данных ГИС — лучшие из лучших.
Мы можем гарантировать, что все взяты из авторитетных источников . Давайте начнем.
1. Esri Open Data Hub
В 2020 году Esri Open Data Hub станет скрытой золотой жилой бесплатных данных ГИС. Например, сейчас он содержит более 250 000+ наборов открытых данных от 5 000+ организаций по всему миру. По этой причине он находится в верхней части нашего списка бесплатных данных ГИС.
В некоторых случаях вам придется просматривать груды данных, потому что их неудобно объединить в одну. Несмотря на дополнительные усилия, это, пожалуй, ваш лучший шанс найти именно то, что вы ищете.
В любом случае поиск удобен с просмотром карты экстента и таблицы. Кроме того, вы можете искать по теме или местоположению и загружать данные в нескольких форматах ГИС. В конце концов, нет ничего более тщательного для данных ГИС, чем Esri Open Data Hub.
| Преимущества | Типы данных |
|---|---|
|
|
2. Данные Natural Earth
Natural Earth Data занимает второе место в списке, поскольку лучше всего соответствует потребностям картографов.По большому счету, все ключевые культурные и физические наборы векторных ГИС-данных доступны в глобальном масштабе и удобны для использования. Наборы растровых данных также обеспечивают красивый рельеф отмывки для вашей карты.
Самое лучшее, что данные Natural Earth находятся в общественном достоянии . Это означает, что вы имеете право использовать, изменять и распространять данные любым способом.
Вот более подробная информация о данных Natural Earth. С точки зрения картографии это несложно. Загрузите Natural Earth Data прямо сейчас.
| Преимущества | Типы данных |
|---|---|
|
|
3. Исследователь Земли Геологической службы США
Что касается спутниковых и аэрофотоснимков, USGS Earth Explorer является одним из крупнейших бесплатных источников данных.Лучшая часть? Вы также можете загрузить данные за пределами США .
Дружественный пользовательский интерфейс упрощает доступ к данным дистанционного зондирования. Фактически, у него даже есть приложение для массовой загрузки, если вам нужно загрузить более одного набора данных.
Регистрация бесплатная. Если вы ищете других поставщиков спутниковых данных, просмотрите наш список из 15 бесплатных источников спутниковых изображений.
| Преимущества | Типы данных |
|---|---|
|
|
4.OpenStreetMap
пользователей ГИС используют возможности OpenStreetMap (OSM) как средство сбора данных. Результатом краудсорсинга являются очень подробные данные. Но я говорю подробно с осторожным оптимизмом.
Хотя OSM открыт для публики, он также создается публикой. Это означает, что точность зависит от автора. По моему опыту, точность очень хорошая. И такие люди, как мы с вами, каждый день работают над полнотой.
Для ГИС-аналитиков, которым нужны бесплатные ГИС-данные на уличном уровне, OSM — это именно то, что вам нужно.Например, это может быть крупнейший инвентарь построек в мире.
Сколько данных создается каждую секунду в OpenStreetMap? Для этого есть карта — OSM Show Me The Way.
| Преимущества | Типы данных |
|---|---|
|
|
5. Центр социально-экономических данных и приложений НАСА (SEDAC)
Центр социально-экономических данных и приложений НАСА (SEDAC) демонстрирует взаимодействие человека с окружающей средой. SEDAC имеет широкий спектр грубых глобальных бесплатных данных ГИС.
Например, их флагманский информационный продукт — это населения мира с привязкой к сетке человек. Имея более 800 цитирований, он включает такие характеристики населения, как возраст, образование и плотность населения.А глобальные масштабы городского и местного населения исходит от ночных огней
Мне нравится вьюер карт SEDAC, потому что вы можете выбрать тематические карты ГИС социально-экономических данных. Если вы хотите собрать данные самостоятельно, этот вариант тоже есть.
| Преимущества | Типы данных |
|---|---|
|
|
6. Открытая топография
Open Topography предоставляет портал для топографических данных и инструментов с высоким пространственным разрешением. В частности, в нем хранятся данные LiDAR, которые в наши дни являются редким и ценным ресурсом.
В настоящее время Open Topography собрал 300 наборов данных с высоким разрешением . Большинство из них — облака точек. Но некоторые доступны только в растровом формате. Их карта данных показывает, что наиболее доступные данные находятся в Соединенных Штатах.Но данные также доступны по Европе, Азии и Австралии.
Если вы не можете найти данные LiDAR для интересующей вас области, лучшим вариантом будет глобальная ЦМР. Эти бесплатные наборы данных ГИС также доступны в Open Topography.
| Преимущества | Типы данных |
|---|---|
|
|
7. Исследователь экологических данных ЮНЕП
Программа ООН по окружающей среде (ЮНЕП) является авторитетным источником данных ООН. Например, он содержит более 500 переменных , таких как пресная вода, климат и здоровье.
Должен признать. Мне было немного сложно исследовать данные ГИС, потому что интерфейс требует времени, чтобы привыкнуть. Если вы нажмете «Дополнительно», вы сможете отфильтровать «Наборы геопространственных данных». Отсюда вы можете бесплатно скачать данные ГИС, такие как климат, стихийные бедствия и экосистемы.
| Преимущества | Типы данных |
|---|---|
|
|
8. Наблюдения за Землей НАСА (NEO)
Представьте себе ежедневные снимки климата и состояния окружающей среды на Земле.Наблюдения за Землей НАСА (NEO) похожи на снимок климата мира в реальном времени.
NEO фокусируется на 5 темах с 50+ глобальными наборами данных , в основном связанных с климатом. Например, данные варьируются от аэрозолей, хлорофилла до температуры поверхности моря. Все это бесплатные наборы данных ГИС, которые вы можете скачать в форматах JPEG, GeoTIFF и Google Earth.
Когда дело доходит до понимания нашего климата, вы не можете жить без NEO НАСА. Если вы не можете найти то, что ищете, у нас есть целый список из 7 бесплатных мировых источников климатических данных
| Преимущества | Типы данных |
|---|---|
|
|
9. Sentinel Satellite Data
Sentinel-2 — это спутниковые снимки с самым высоким разрешением, доступные для общественности бесплатно. Его интерфейс — это Центр открытого доступа Copernicus.
Во-первых, вы должны зарегистрироваться, чтобы создать учетную запись. Но это того стоит.Затем выберите интересующий вас район, щелкнув карту правой кнопкой мыши. Наконец, выберите продукт S2A или S2B, который вы хотите загрузить и загрузить.
В Центре открытого доступа Copernicus также хранится Sentinel-1 — радар с синтезированной апертурой. Итак, будьте осторожны с тем, что вы выбираете для загрузки.
ПОДРОБНЕЕ : Как бесплатно загрузить спутниковые данные Sentinel
| Преимущества | Типы данных |
|---|---|
|
|
10. Terra Populus
Terra Populus (сокращенно TerraPop) объединяет данные переписей из более чем 160 стран мира. Фактически, он охватывает до шести десятилетий для данных на уровне домохозяйств и агрегированных данных по более чем 80 странам.
Уникальность этого метода в том, что вы можете исследовать временные и пространственные изменения . Это не только для исследований. Но каждый может получить доступ к изменениям в системе человек-среда для географического пространства.
TerraPop также включает в себя основные данные о растительном покрове, землепользовании и климате. Он поддерживается Национальным научным фондом и Миннесотским университетом. Даже сейчас обновления продолжают выпускаться.
| Преимущества | Типы данных |
|---|---|
|
|
Бонус 1: FAO GeoNetwork
Мы собираемся выйти за рамки наших 10 бесплатных источников данных, так что это своего рода бонус. Это GeoNetwork ФАО, еще один портал бесплатных данных ГИС из Организации Объединенных Наций.
GeoNetwork направлена на улучшение глобального устойчивого развития .Например, глобальное сельское хозяйство, продовольственная безопасность и рыболовство являются одними из основных бесплатных данных ГИС.
| Преимущества | Типы данных |
|---|---|
|
|
Бонус 2: Глобальная карта ISCGM
К сожалению, портал Международного руководящего комитета по глобальному картографированию (ISCGM) больше не существует.Но это не значит, что данные исчезли навсегда. Это потому, что ISCGM заархивировала свои данные в Global Map Github.
Global Map по-прежнему обладает серьезными преимуществами благодаря бесплатным данным ГИС. Например, двумя ключевыми наборами данных здесь являются глобальный земной покров и процент древесного покрова. Но это не все. Здесь также есть наборы векторных данных о культуре и природе.
С момента переезда регистрация больше не требуется. Несмотря на отсутствие обновлений, бесплатные ГИС-данные от ISCGM по-прежнему являются источником, который многие из нас могут использовать на своих картах.
| Преимущества | Типы данных |
|---|---|
|
|
Скачать бесплатные данные ГИС
В идеальном мире вы сможете найти все бесплатных данных ГИС , которые вам нужны, на одном веб-сайте.Конечно, он должен быть бесплатным, загружаемым из авторитетного источника.
Но вы знаете, что такое упражнение. Мир несовершенен, жизнь несправедлива.
Вот почему мы составили список из 10 глобальных наборов данных ГИС, которые вы можете скачать бесплатно.
Используя этот список, вы сразу же стали лучше разбираться в этих 10 бесплатных источниках данных ГИС.
Больше бесплатных данных ГИС
Если вы не нашли то, что искали, воспользуйтесь дополнительными бесплатными источниками данных ГИС, которые улучшат ваши карты:
Введение в векторы — Положение, Линия, Свободные и Единичные векторы | Видео по математике | Подготовка к совместным вступительным экзаменам в ИИТ | Совместный вступительный экзамен в высшую школу Индийского технологического института
»Скачать расшифровку стенограммы англо-американского (PDF)
Всем привет, добро пожаловать в эту серию видео по теме векторов.
Эта глава важна для математики, а также служит основой для следующей главы, то есть трехмерной геометрии.
По этой теме будет серия видео.
В этом первом видео я просто хочу поговорить о самых простых вещах.
Попробую определить векторы.
Я считаю, что среди учеников существует большая путаница даже в таких элементарных вещах, как вектор положения, вектор линии, единичный вектор и величина.
Я думаю, если вы действительно сможете сосредоточиться на этом видео и попытаться понять разницу между вектором положения и вектором линии — это многое прояснит для вас.
Позвольте мне начать с определения вектора положения.
Во-первых, прежде чем я перейду к вектору положения, позвольте мне кратко резюмировать для вас векторы на случай, если вы не знакомы.
Я думаю, вы уже узнали о векторах в таких разделах физики, как кинематика, силы.
Вы должны знать, что векторы — это величины, которые имеют как величину, так и направление.
И они очень важны для научных исследований в целом.
Позвольте мне начать с определения вектора положения.
Итак, вектор положения — это вектор, соединяющий начало координат с точкой.
И, как следует из названий, в основном этот вектор положения соответствует положению одной точки.
Я думаю, здесь многие студенты запутались.
В векторах хорошо то, что они всегда будут трехмерными, и они будут действительно полезны в следующей главе, посвященной трехмерной геометрии.
Для вас важно понимать векторы положения и, как линейный вектор, единичный вектор.
Итак, давайте сначала сосредоточимся на векторе позиции.
Итак, каково определение: вектор положения — это вектор, соединяющий начало координат с точкой.
Допустим, у нас есть точка P с координатами Px Py Pz.
Назовем это осью x, осью y и осью z.
Вектор положения — это вектор, соединяющий начало координат, которое находится в точке O с точкой P, и указывающий в направлении на P.
Это направление очень важно, потому что если оно находится в противоположном направлении, то вектор будет противоположным.
Когда мы пишем вектор OP (он называется вектором OP), первая буква находится там, где линия стрелки соединяется со второй точкой (или вторым алфавитом, в данном случае P).
Вектор OP также обозначает направление вектора.
Я пытаюсь сказать, что если у вас есть вектор OP, то вектор будет начинаться с O и заканчиваться на P.
В этом случае вектор OP означает Px \ i_cap .. (надеюсь, вы знакомы с \ i_cap : \ i_cap означает направление оси x).(1.2).
Вектор положения всегда для точки.
Пожалуйста, не забывайте это базовое определение вектора положения.
Поверьте мне, что иногда во время главы вектора вы запутаетесь, если забудете это определение.
Поэтому, пожалуйста, помните, что вектор положения всегда и всегда для точки.
Теперь попробуем перейти к новому типу векторов, который называется линейным вектором.
Вектор положения для точки.
Линейный вектор — это линия.
Вот и все.
Если у вас есть линия, скажем, соединяющая две точки A и B.
Если я напишу здесь вектор, а здесь вектор b, что это означает?
вектор для точки A, а вектор b для точки B.
Всякий раз, когда вы видите что-то подобное в скобках, это означает, что это для точки или это вектор положения.
Другими словами, вектор — это вектор OA, а вектор b — это вектор OB.
И векторы OA и вектор OB являются векторами положения точек A и B.
Даже это базовое определение сбивает людей с толку.
Так что всякий раз, когда вы видите точку и что-то написанное в скобках, это всегда означает вектор положения.
Итак, что означает линейный вектор?
Линейный вектор означает соединение двух точек.
Если у нас есть вектор AB: начиная с A и заканчивая B.
Стрелка идет от A к B.
Этот вектор определяется как вектор b — вектор.
Другими словами, AB = OB — OA.
Давайте попробуем взять один быстрый пример, который поможет нам понять эту концепцию.
Какой вектор соединяет \ sin (\ theta) \ i_cap + \ cos (\ theta) \ j_cap и (0,0,1).
Какова его величина?
Попробуем найти ответ.
Это может немного сбить с толку из-за того, как здесь написано.
\ sin (\ theta) \ i_cap + \ cos (\ theta) \ j_cap — это в основном точка, для которой вам дан вектор положения.(1/2).
В этой части я просто хотел подчеркнуть, что вектор линии предназначен для линии, а вектор положения — для точки.
Теперь есть еще векторы, которые путают людей.
Здесь оба вектора были фиксированными, т.е. векторы начинались с A и перешли к B.
Это началось с O и перешло к P.
Однако вы должны понимать, что иногда векторы не фиксируются. Они фиксируются только по величине и направлению, но не по положению.
Например, если мне дали вектор a, и мне сказали, что это \ i_cap + \ j_cap + \ k_cap, и мне не дали никакой другой информации об этом.
Что будет представлять этот вектор? Этот вектор может представлять множество вещей.
Например, он может представлять такую точку, что вектор OA для точки (1,1,1) будет \ i_cap + \ j_cap + \ k_cap.
Точно так же это может также представлять линейный вектор, которым он может быть (b_vector — a_vector).
Он может соединять две точки, и разница может быть как \ i_cap + \ j_cap + \ k_cap.
По свободному вектору я просто знаю направление и величину. Это бесплатно для перевода в трехмерном пространстве.
Допустим, это вектор. Если этот вектор свободно перемещается — он не меняет своего направления и не меняет своей величины.
Если вы не указали, начинается ли вектор из исходной точки или позиции, или он соединяет две точки, это также может быть свободный вектор.
Я хочу подчеркнуть, что позже в этой главе вы увидите, что люди часто не понимают, что такое свободные векторы, поскольку они не могут этого понять. Их также смущает вектор, соединяющий две точки, и когда они видят обозначения — a_vector в скобках и b_vector в скобках.
Подведем итог: когда вы видите точку, это всегда означает вектор положения.
Когда вы видите вектор, соединяющий две точки, это означает линейный вектор, который можно рассчитать следующим образом.3 и извлеките из этого квадратный корень.
Однако есть кое-что, что также важно для вектора, а именно его направление.
Итак, позвольте мне начать с определения единичного вектора.
Всякий раз, когда я пишу vector_a, я также могу записать vector_a как величину vector_a в единичный вектор.
Что это значит?
Это означает, что вектор имеет некоторую величину, которую вы можете вычислить, возведя в квадрат x_component, y_component, z_component, сложив их и взяв квадратный корень.И этот a_cap — не что иное, как единичный вектор.
Я предпочитаю называть это «направление».
Единичный вектор и направление являются синонимами.
Итак, всякий раз, когда вы видите вектор: это произведение его величины и направления (или его единичных векторов). (1/2).(1/2).
Это направление, это единичный вектор и величина.
Напишем еще вопрос.
Какое направление оси x?
Направление означает единичный вектор. Итак, в этом случае a_cap будет направлением или чем-то еще с величиной 1. Мы знаем, что направление оси x равно \ i_cap, и оно также имеет величину 1. Так что это просто \ i_cap. \ i_cap — это не что иное, как направление.
Итак, всякий раз, когда я пишу Px \ i_cap + Py \ j_cap + Pz \ k_cap, это означает, что я переместил Px в направлении x, а затем я переместил Py в направлении y, а затем я переместил Pz в направлении k .
Вот как вы определяете направление единичными векторами.
В этом видео мы рассмотрели самые простые вещи.
Вектор положения относится к точке.
Линейный вектор — это вектор, соединяющий две точки.
Свободные векторы — это вектор, который не является ни точкой, ни линией, а что-то, что может свободно перемещаться в пространстве, хотя имеет фиксированную величину и фиксированное направление.