Host free: Бесплатный Хостинг с поддержкой PHP, MySQL и cPanel. Без Рекламы

Содержание

Бесплатный Хостинг серверов

Мы считаем, что хостинг игровых серверов должен быть доступен каждому, поэтому мы предлагаем 100% бесплатный хостинг серверов, который работает круглосуточно и без выходных. Попытайтесь сервер для себя сегодня и не забудьте проверить наши платные планы.

Эффективная защита от DDOS

Нет очередей в часы пик

Доступны для всех

Выберите игру

FREEMinecraftПосмотреть

FREECounter-StrikeПосмотреть

FREEUnturnedПосмотреть

FREETerrariaПосмотреть

FREEGTA 5Посмотреть

FREEMindustryПосмотреть

FREEFactorioПосмотреть

FREETeam fortress 2Посмотреть

FREEQuake LiveПосмотреть

FREEGarry’s ModПосмотреть

FREEStarboundПосмотреть

FREEKilling Floor 2Посмотреть

FREECore KeeperПосмотреть

Реальные клиенты. Реальный сервис

Смотрите наши отзывы на

Наш рейтинг

Excellent ( 4,7/5 )

The best Minecraft host ever!

I rent Minecraft here for the third month (4gb), addons and plugins are installed directly from the panel, very quickly, I have not seen anything like this before))

They provide sftp access, so you can change the startup flags on your panel without contacting customer support.

With the replacement of games, the game became even more interesting!

From the beginning I bought Minecraft, but then changed to GTA, everything is absolutely free, and most importantly it takes only a matter of seconds

Amazing hosting

Everything is at the highest level, Tech support is fast and efficient, the hardware is just a bomb, the servers are super, I bought an average build for the Unturned server, nothing lags, does not hang, the average ping is 45.
Hosting is just a bomb👍

Godlike.host looks like a promising…

Godlike.host looks like a promising project with a great website. I look forward to opening

Как создать свой бесплатный сервер

Преимущества

Сборки серверов
на базе Ryzen

Удобная и функциональная панель
Godlike Panel

Сверхбыстрая автоматическая
установка сразу после оплаты

Дополнительные порты
для вашего сервера

До трех бэкапов
в сутки бесплатно

Эффективная защита
от DDOS

Полнофункциональный
доступ по SFTP

Лучшая
Экспертная тех. поддержка

Вопрос-ответ

Как работают бесплатные серверы в Godlike?
Чтобы каждый мог использовать бесплатный сервер Godlike, мы разработали систему бесплатных серверов с продлением. Это означает, что после оформления сервер выдается на 5 часов. Каждые 5 минут можно увеличивать время работы на 90 минут до 24 часов. Если вы не продлили время работы сервера, он будет приостановлен на 72 часа, в течение которых вы можете снова возобновить его работу. По истечении 72 часов сервер удаляется безвозвратно.
Что делать, если я не успеваю продлить сервер?
В этом случае вы можете побуждать игроков продлить работу сервера, например, вы можете давать игрокам разнообразные бонусы на сервере. Для этого мы сделали функцию публичной ссылки, перейдя по которой любой сможет продолжить сервер. Настройка адреса ссылки и выдача бонуса настраивается на панели.
Что делать, если вы не хотите заниматься продлением сервера?
Если вы не желаете иметь эти ограничения, вы можете приобрести платную услугу на нашем сайте.

Кони-Айленд проведет этим летом бесплатную серию фильмов «Флики на пляже»

Фото: Shutterstock

Смотрите культовую классику и любимые боевики на песке.

Кони-Айленд — это игровая площадка жителей Нью-Йорка, когда наступает лето, от Парада русалок до Луна-парка. А теперь к развлечениям в теплую погоду добавляются бесплатные фильмы.

При содействии члена совета Ари Кагана Альянс Кони-Айленда проводит в Кони-Айленд-Бич сериал «Летние фильмы 2023 года» с бесплатными фильмами раз в две недели каждый второй вечер понедельника с июня по август этого месяца. Показы под открытым небом будут проходить на пляже на Западной 12-й улице, начиная с заката, и посетители могут принести свои одеяла или стулья, чтобы плюхнуться и насладиться фильмами прямо на песке.

«Уже более десяти лет Альянс Кони-Айленда предлагает бесплатные фильмы на пляже для семейного просмотра. Мы надеемся, что любой, кто хочет посмотреть уникальный фильм под открытым небом, присоединится к нам на пляже и насладится прекрасным видом на горизонт Кони-Айленда на закате», — сказала Синди Вурдерис, менеджер по маркетингу, мероприятиям и связям с общественностью Альянса Кони-Айленда.

Кинотеатральные праздники начнутся в понедельник, 26 июня, с культового классического фильма 1979 года «Воины», , в центре которого, конечно же, уличная банда из Нью-Йорка, которая должна пробиться из северного Бронкса на свою родную территорию. — как вы уже догадались — Кони-Айленд . В июль Понедельник, 10 июля, вы можете устроиться на показ «Лучшего стрелка Тома Круза: Маверик, » и пообщаться с Марио, Луиджи и остальными жителями Грибного королевства во время показа Super Mario Bros. Movie — 24 июля. Летний сериал завершится в понедельник, 7 августа, выпуском супергероев Marvel, «Доктор Стрэндж в мультивселенной безумия» 2022 года, с Бенедиктом Камбербэтчем, Элизабет Олсен и Чиветелем Эджиофор в главных ролях.0013 .

Конечно, поскольку это мероприятия на открытом воздухе, все показы будут показаны в зависимости от погодных условий. Хотите еще больше фильмов на свежем воздухе этим летом? Посмотрите сериал «Ночи кино в Брайант-парке», если вы предпочитаете сидеть на траве, а не на песке, и линейку «Rooftop Cinema Club Midtown: Summer 2023», если вы хотите, чтобы ваши фильмы были красивыми!

Поделитесь историей

Электронное письмо, которое вам действительно понравится

Подпишитесь на нашу рассылку.

Откройте для себя лучшее из города, в первую очередь.

Вводя свой адрес электронной почты, вы соглашаетесь с нашими Условиями использования и Политикой конфиденциальности, а также соглашаетесь получать электронные письма от Time Out о новостях, событиях, предложениях и рекламных акциях партнеров.

🙌 Отлично, вы подписались!

Спасибо за подписку! Ждите скоро свой первый информационный бюллетень в своем почтовом ящике!

Popular on Time Out

[изображение]
[название]

Последние новости

[изображение]
[название]
9004 8 Реклама
Получите нас в своем почтовом ящике
Подпишитесь на нашу рассылку новостей, чтобы быть в курсе последних новостей из вашего города и за его пределами. новости, события, предложения и акции партнеров.
🙌 Отлично, вы подписались!
Спасибо за подписку! Ждите скоро свой первый информационный бюллетень в своем почтовом ящике!
Эффективная индукция свободных от трансгенов плюрипотентных стволовых клеток человека с использованием вектора на основе вируса Сендай, РНК-содержащего вируса, не встраивающегося в геном хозяина
. 2009;85(8):348-62.
doi: 10.2183/pjab.85.348.
Ноэми Фусаки ¹ , Хироши Бан, Акиё Нишияма, Коити Саэки, Мамору Хасэгава

принадлежность
- ¹ DNAVEC Corporation, город Цукуба, Ибараки, Япония. [email protected]
- PMID: 19838014
- PMCID: PMC3621571
- DOI: 10.2183/пяб.85.348
Бесплатная статья ЧВК
Ноэми Фусаки и др. Proc Jpn Acad Ser B Phys Biol Sci. 2009 г..
Бесплатная статья ЧВК
. 2009;85(8):348-62.
doi: 10.2183/pjab.85.348.
Авторы
Ноэми Фусаки ¹, Хироси Бан, Акиё Нишияма, Коити Саэки, Мамору Хасэгава
принадлежность
- ¹ DNAVEC Corporation, город Цукуба, Ибараки, Япония. [email protected]
- PMID: 19838014
- PMCID: PMC3621571
- DOI: 10.2183/пяб.85.348
Абстрактный
Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК) были получены из соматических клеток путем введения факторов репрограммирования.
Интеграция чужеродных генов в геном хозяина является техническим препятствием для клинического применения. Здесь мы показываем, что вирус Сендай (SeV), РНК-вирус, не несущий риска изменения генома хозяина, является эффективным решением для создания безопасных иПСК. Сендай-вирусные иПСК человека, экспрессирующие гены плюрипотентности, демонстрировали деметилирование, характерное для перепрограммированных клеток. Трансгены, полученные из SeV, уменьшались во время клеточного деления. Кроме того, вирусы можно было легко удалить с помощью негативной селекции, опосредованной антителами, с использованием маркера клеточной поверхности HN, который экспрессируется на инфицированных SeV клетках. Свободные от вирусов иПСК дифференцировались в зрелые клетки трех эмбриональных зародышевых листков in vivo и in vitro, включая бьющиеся кардиомиоциты, нейроны, кости и клетки поджелудочной железы. Наши данные показали, что высокоэффективная, неинтегрирующая векторная система на основе SeV обеспечивает критическое решение для перепрограммирования соматических клеток и ускоряет клиническое применение.

Цифры
Рис. 1

Экспрессия экзогенных генов в…
Рис. 1

Экспрессия экзогенных генов в фибробластах человека с помощью векторов SeV. A. Эффективная индукция…
рисунок 1
Экспрессия экзогенных генов в фибробластах человека с помощью векторов SeV. A.
Эффективная индукция кДНК GFP с помощью TSΔF/SeV в BJ и HDF при MOI 3. BC: яркий контраст. B. Схематическое представление геномов векторов SeV. Гены перепрограммирования были вставлены в 18+, PM, HN, HNL и Leis (L) соответственно. Уровни экспрессии вставленных генов снижались в зависимости от места вставки (полярный эффект: ссылки 21), как показано вестерн-блоттингом на 3-й день после заражения. Анти-SeV-блоттинг был проведен для подтверждения одинаковой инфекционной эффективности векторов.
Рис. 2

Эффективное создание ИПСК человека…
Рис. 2

Эффективное получение ИПСК человека с помощью неинтегрирующих векторов SeV. А. Эффективность перепрограммирования…

Рис. 2
Эффективное создание ИПСК человека с помощью неинтегрирующих векторов SeV. A. Эффективность перепрограммирования с векторами SeV. Колонии iPS определяли по ALP-положительной и ES-подобной морфологии. Номера дорожек соответствуют условиям, перечисленным в столбце под рисунком. Каждая точка представляет один эксперимент. Столбцы представляют среднюю эффективность для каждого условия. B. ALP-окрашивание растущих клеток на чашках диаметром 100 мм. C. Типичные ALP-положительные колонии (масштабная линейка: 100 мкм). Нумерация С и В соотносится с номерами в столбце А . Колонии в условиях 1, 2 и без кормушки были аналогичны колониям в 3 (данные не показаны).
Рис. 3

Экспрессия маркеров чЭС и…
Рис. 3

Экспрессия маркеров hES и активность теломеразы в SeV-iPSC. A. ОТ-ПЦР анализ…
Рис. 3
Экспрессия маркеров hES и активность теломеразы в SeV-iPSC. A. ОТ-ПЦР-анализ генов маркеров ЭС клеток человека. Праймеры, используемые для Oct3/4, Sox2, Klf4 и c-Myc, были разработаны для обнаружения экспрессии эндогенных генов, но не трансгенов. Продолжение: ПЦР без кДНК. B. Теломеразная активность человеческого SeV-iPSC. Теломеразную активность определяли методом TRAP. Образцы, инактивированные нагреванием (+), использовали в качестве отрицательного контроля. C. Иммунофлуоресцентное окрашивание привитых клонов маркерами ES клеток человека (Tra-1-60, Tra-1-81, SSEA-4 и Nanog).
Колонии SeV-iPS были положительными по ALP и отрицательными по SSEA-1, как и в клетках hES. Ядра окрашивали TO-PRO3 (синий).
Рис. 4

Геномный саузерн-блоттинг, кариотипирование и…
Рис. 4

Геномный саузерн-блоттинг, кариотипирование и фингерпринтинг SeV-iPSC. A. ДНК-дактилоскопия SeV-iPS…
Рис. 4
Геномный саузерн-блоттинг, кариотипирование и фингерпринтинг SeV-iPSC. A. ДНК-фингерпринтинг клонов SeV-iPS. ПЦР-анализ трех локусов с переменным числом тандемных повторов (VNTR) D17S1290, MCT118 и ApoB-100 с использованием геномной ДНК из клонов SeV-iPS подтвердил, что эти клоны происходят из фибробластов BJ или HDF человека. B1, HNL1 и HNL5 были получены из BJ; Xh2, 7H5, 7H8 и 7h20 были из HDF.
B. Вирусные трансгены не были обнаружены в геноме хозяина при анализе геномным Саузерн-блоттингом. C. Кариотипирование SeV-iPSC. Для кариотипирования использовали свободные от вирусов ГНЛ SeV-iPSC на 34-м пассаже.
Рис. 5

Векторы SeV были разведены и…
Рис. 5

Векторы SeV были разведены и потеряны во время роста клеток. А. Кинетика трансгенных…
Рис. 5
векторов SeV были разведены и потеряны во время роста клеток. A. Кинетика экспрессии трансгена определена с помощью ОТ-ПЦР с использованием комбинации специфических праймеров для SeV и трансгенов. продолжение: нет шаблона. B. Кинетика экспрессии генома SeV в процессе роста клеток методом количественной ПЦР в реальном времени. Pn означает номера проходов.
C. Экспрессия белка, происходящего от SeV, определена вестерн-блоттингом с поликлональным антителом против SeV. Количество пассажей коррелирует с A. cont: положительный контроль из инфицированных SeV клеток LLC-MK2. Вирусные белки в HNL в это время немного присутствовали (P8), но белки HNL1 были полностью потеряны позже на P17, а также HNL1 на P9 ( B ). д. Иммуноокрашивание против SeV показало, что распределение SeV было гетерологичным в колониях iPS (верхний). SeV может быть удален с помощью отрицательной селекции, опосредованной анти-HN-антителом, с использованием IMag-шариков, конъюгированных с IgG1 мыши. Антитело против HN разделяло SeV-отрицательную популяцию (-) и SeV-обогащенную популяцию (+).

Рис. 6

Метилирование ДНК и глобальный ген…
Рис. 6

Метилирование ДНК и глобальные профили экспрессии генов SeV-iPSC. A. Анализ метилирования…
Рис. 6
Профили метилирования ДНК и глобальной экспрессии генов SeV-iPSC. A. Анализ метилирования промоторных областей Oct3/4 и Nanog в SeV-iPSC. B. Сравнили глобальные паттерны экспрессии генов между SeV-iPSC (HNL1) и BJ, ES клетками человека (H9) и HDF-iPSC с микрочипами. Линиями показаны диагональные и 5-кратные изменения между двумя образцами.
Рис. 7

In vitro Дифференциация без трансгенов…
Рис. 7

In vitro Дифференцировка безтрансгенных SeV-iPSC. A. Дифференцировка мононуклеарных клеток in vitro …
Рис. 7
In vitro Дифференциация свободных от трансгенов SeV-iPSC. A. Дифференцировка мононуклеарных клеток in vitro (мезодерма: показано окрашиванием по Райту-Гимзе) через эмбриоидные тельца, предполагаемые дофаминергические нейроны, коэкспрессирующие тирозингидроксилазу (TH) (эктодерма), дефинитивную энтодерму (Sox17) и клетки поджелудочной железы (PDX1). B. In vitro Дифференцировка кардиомиоцитов и мононуклеарных клеток из SeV-iPSC через тела эмбрионов с использованием коктейлей цитокинов (SCF, Flt3L, TPO, G-CSF, IGF-2 и VEGF). В адгезивной культуре образовывались кроветворные мешковидные структуры, заполненные мононуклеарными клетками (слева, вверху) и пульсирующие колонии (слева, посередине). Анализ FACS показывает дифференцировку SeV-iPSC в мононуклеарные клетки (нейтрофилы, моноциты и макрофаги), экспрессирующие CD34, CD45, CD33 и специфический для нейтрофилов маркер CD66b (справа). Анализ RT-PCR показывает, что плюрипотентный маркер (Nanog) был снижен, а различные маркеры дифференцировки, специфичные для кардиомиоцитов (TnTc, MEF2C, MYHCB), были увеличены после дифференцировки (слева, внизу). У: недифференцированный; ЭБ: эмбриональное тело; Д: дифференцированный.
Рис. 8

In vivo плюрипотентность без трансгенов…
Рис. 8

In vivo плюрипотентность бестрансгенных SeV-iPSC. Окраска срезов тератомы гематоксилином и эозином…
Рис. 8
In vivo плюрипотентность свободных от трансгенов SeV-iPSC. Окрашивание гематоксилином и эозином срезов тератомы клонов SeV-iPS (через 6 недель после инъекции мышам SCID). Ткани были дифференцированы из HNL (от A до C), HNL1 (от D до I) из неонатального фибробласта человека, происходящих из BJ, и Xh2 (от J до L), происходящих из фибробласта HDF взрослых, содержащих множественные ткани, полученные из трех зародышевых листков: железистые структуры (A, G, K), хрящ (B, J), кость (C, F, белые стрелки) и костномозгоподобная структура (F), эпителий (J, D), переходный эпителий (E), популяция секретирующих -подобные клетки (Б, Г, обозначены черными стрелками), мышечные (В, И, К, М) и клубочки почечноподобной ткани (З).
См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC
Похожие статьи
- Эффективное создание индуцированных трансгеном плюрипотентных стволовых клеток человека (ИПСК) с помощью термочувствительных векторов вируса Сендай.
  Бан Х., Нисишита Н., Фусаки Н., Табата Т., Саеки К., Шикамура М., Такада Н., Иноуэ М., Хасэгава М., Кавамата С., Нишикава С. Бан Х и др. Proc Natl Acad Sci U S A. 2011 Aug 23;108(34):14234-9. doi: 10.1073/pnas.1103509108. Epub 2011 5 августа. Proc Natl Acad Sci U S A. 2011. PMID: 21821793 Бесплатная статья ЧВК.
- Простое получение скелетных мышц из плюрипотентных стволовых клеток человека с использованием термочувствительного вектора вируса Сендай.
  Тан Г.В., Кондо Т., Имамура К., Суга М., Энами Т., Нагахаши А., Цукита К., Иноуэ И., Кавагути Дж., Шу Т., Иноуэ Х. Тан Г.В. и соавт. J Cell Mol Med. 2021 Окт;25(20):9586-9596. doi: 10.1111/jcmm.16899. Epub 2021 12 сентября. J Cell Mol Med. 2021. PMID: 34510713 Бесплатная статья ЧВК.
- Создание линии иПСК человека (MUSIi007-A) из периферической крови нормального человека с использованием вирусных векторов Сендай.
  Потират П., Ваттанапанич М., Кхеоламай П., Иссарагрисил С. Потират П. и соавт. Стволовые клетки Res. 2018 окт;32:43-46. doi: 10.1016/j.scr.2018.08.014. Epub 2018 17 августа. Стволовые клетки Res. 2018. PMID: 30172906
- Взгляд на подходы к перепрограммированию без ДНК для создания индуцированных плюрипотентных стволовых клеток без интеграции для перспективных биомедицинских приложений.
  Borgohain MP, Haridhasapavalan KK, Dey C, Adhikari P, Thummer RP. Borgohain MP, et al. Stem Cell Rev Rep. 2019 Apr;15(2):286-313. doi: 10.1007/s12015-018-9861-6. Редакция стволовых клеток, 2019 г. PMID: 30417242 Обзор.
- Разработка векторов вируса Сендай и их потенциальное применение в генной терапии и регенеративной медицине.
  Наканиси М. , Оцу М. Наканиши М. и соавт. Карр Джин Тер. 2012 Окт;12(5):410-6. дои: 10.2174/156652312802762518. Карр Джин Тер. 2012. PMID: 22920683 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
Посмотреть все похожие статьи
Цитируется
- Применение стволовых клеток человека для моделирования генетической нейросенсорной тугоухости и болезни Меньера.
  Ламолда М., Фрехо Л., Гальего-Мартинес А., Лопес-Эскамес Х.А. Ламолда М. и др. Клетки. 2023 23 марта; 12 (7): 988. doi: 10.3390/cells12070988. Клетки. 2023. PMID: 37048061 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
- Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки и их применение при боковом амиотрофическом склерозе.
  Du H, Huo Z, Chen Y, Zhao Z, Meng F, Wang X, Liu S, Zhang H, Zhou F, Liu J, Zhang L, Zhou S, Guan Y, Wang X. Ду Х и др. Клетки. 2023 22 марта; 12 (6): 971. doi: 10.3390/cells12060971. Клетки. 2023. PMID: 36980310 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
- Источники стволовых клеток и характеристика в разработке продуктов на основе клеток для лечения заболеваний сетчатки: отчет мэрии NEI.
  Fortress AM, Miyagishima KJ, Reed AA, Temple S, Clegg DO, Tucker BA, Blenkinsop TA, Harb G, Greenwell TN, Ludwig TE, Bharti K. Крепость AM и др. Стволовые клетки Res Ther. 2023 29 марта; 14(1):53. doi: 10.1186/s13287-023-03282-y. Стволовые клетки Res Ther. 2023. PMID: 36978104 Бесплатная статья ЧВК.
- Получение перепрограммированных вирусом Сендай вируса человека иПСК-нейрональных предшественников: In Vitro и In Vivo Характеристика безопасности после трансплантации.
  Шигё М., Кобаяши Ю., Платошин О., Марсала С., Като Т. мл., Такамура Н., Йошида К., Кишино А., Браво-Эрнандес М., Юхас С., Юхасова Дж., Студеновска Х., Прокс В., Чаччи Д.Д., Марсала М. Шигё М. и др. Трансплантация клеток. 2023 янв-декабрь;32:9636897231163232. дои: 10.1177/09636897231163232. Трансплантация клеток. 2023. PMID: 36959733 Бесплатная статья ЧВК.
- Прямое перепрограммирование клеток и фенотипическое преобразование: анализ экспериментальных попыток превратить астроциты в нейроны у взрослых животных.
  Деннисон Р., Усуга Э., Чен Х., Пол Дж.З., Арбелаес К.А., Тенг Ю.Д. Деннисон Р. и др. Клетки. 2023 14 февраля; 12 (4): 618. doi: 10.3390/cells12040618. Клетки. 2023. PMID: 36831283 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
Просмотреть все статьи «Цитируется по»
Рекомендации
1. 1. Такахаши, К. и Яманака, С. (2006) Индукция плюрипотентных стволовых клеток из эмбриональных и взрослых культур фибробластов мыши с помощью определенных факторов. Ячейка 126, 663–676. — пабмед
2. 1. Махерали Н., Шридхаран Р., Се В., Утикал Дж., Эминли С., Арнольд К. и соавт. (2007) Непосредственно перепрограммированные фибробласты демонстрируют глобальное эпигенетическое ремоделирование и широкий вклад тканей. Клеточная стволовая клетка 1, 55–70 — пабмед
3. 1. Окита, К., Ичисака, Т. и Яманака, С. (2007) Генерация зародышевых компетентных индуцированных плюрипотентных стволовых клеток. Природа 448, 313–317 — пабмед
4. 1. Wernig, M., Meissner, A., Foreman, R., Brambrink, T., Ku, M., Hochedlinger, K.et al. (2007)Перепрограммирование фибробластов in vitro в плюрипотентное состояние, подобное ES-клеткам. Природа 448, 318–324 — пабмед
5. 1. Такахаши К., Танабэ К., Охнуки М., Нарита М., Ичисака Т., Томода К. и др. (2007) Индукция плюрипотентных стволовых клеток из фибробластов взрослого человека с помощью определенных факторов.